| 巢式PCR法构建人细胞色素P4501A1基因cDNA全长T载体 |
| |
| 引用本文： | 肖勇梅,刘移民,魏青,侯孟君,招小林,凌文华.巢式PCR法构建人细胞色素P4501A1基因cDNA全长T载体[J].广东医学,2005,26(8):1046-1048. |
| |
| 作者姓名： | 肖勇梅 刘移民 魏青 侯孟君 招小林 凌文华 |
| |
| 作者单位： | 中山大学公共卫生学院预防医学系,广州,510089;广东省广州市职业病防治院,510620 |
| |
| 基金项目： | 广东省自然科学基金资助项目(编号:0125042) |
| |
| 摘 要： | 目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM -T载体。方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM- 000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-PCR方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5α,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定, 再行测序分析。结果重组质粒PCR扩增得到1568 bp的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%。结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-PCR是一种简便、特异、灵敏的方法, 可用于基因的检测和载体的构建。
|
| 关 键 词： | 巢式-PCR 细胞色素P450基因 T载体 测序分析 |
| 收稿时间： | 2005-04-26 |
| 修稿时间： | 2005年4月26日 |
Cloning the whole cDNA of human cytochrome 1A1 gene by nest- PCR |
| |
| Xiao YongMei;Liu YiMin;Wei Qing;Hou MengJun;Zhao XiaoLin;Ling WenHua.Cloning the whole cDNA of human cytochrome 1A1 gene by nest- PCR[J].Guangdong Medical Journal,2005,26(8):1046-1048. |
| |
| Authors: | Xiao YongMei;Liu YiMin;Wei Qing;Hou MengJun;Zhao XiaoLin;Ling WenHua |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Nest-PCR Cytochrome P450 T-vector Sequencing |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
