慢病毒载体PLKO.1-shHIF-2α的构建及鉴定 |
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引用本文: | 刘鹏飞,崔春萍,门同义.慢病毒载体PLKO.1-shHIF-2α的构建及鉴定[J].山东医药,2014(14):32-34. |
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作者姓名: | 刘鹏飞 崔春萍 门同义 |
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作者单位: | [1]山东省医学科学院,济南250021 [2]济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院 ,济南250021 [3]军事医学科学院放射与辐射医学研究所 ,济南250021 [4]山东省千佛山医院,济南250021 |
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摘 要: | 目的:构建绿色荧光蛋白(GFP)标记的干涉缺氧诱导因子(HIF)-2α表达的慢病毒载体,并对所得产物进行鉴定。方法体外合成的单链HIF-2α干涉片段经过退火后形成的双链片段和以质粒 PCDH为模板扩增出的EF1-EGFP 均与PLKO.1-puro连接,形成重组的慢病毒载体质粒PLKO.1-shHIF-2α,后者与pMD2G,pSAX2共转染293 FT细胞中进行包装,产生重组慢病毒颗粒。用其感染786-0细胞,检测细胞中GFP表达情况。结果成功扩增出干涉HIF-2α片段和EF1-EGFP片段,酶切鉴定及测序均证实PLKO.1-shHIF-2α质粒构建成功。转染293FT细胞产生的重组慢病毒颗粒感染786-0细胞后高表达绿色荧光。结论成功构建了高效的带GFP报告基因并稳定干涉HIF-2α表达的慢病毒载体。
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关 键 词: | 肾细胞癌 缺氧诱导因子-2α 绿色荧光蛋白 RNA干扰 |
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