甲亢宁胶囊含药血清对M22刺激FRTL-5细胞增殖的影响及自噬在其中的作用

目的探讨甲亢宁胶囊含药血清对甲状腺刺激性抗体(TSAb)单克隆抗体M22刺激Fisher大鼠甲状腺细胞系(FRTL-5)增殖作用和自噬的影响。方法体外培养FRTL-5细胞,采用不同浓度及时间观察M22刺激细胞增殖的量效关系,并确定作用最佳浓度及时间并制备甲亢宁胶囊含药血清。将FRTL-5细胞分为模型组(M22刺激24 h+15%空白大鼠血清),中药低、中、高剂量组(M22刺激24 h后5%、10%、15%甲亢宁胶囊含药血清干预24 h),正常组(15%空白大鼠血清)。采用CCK8法、酶联免疫竞争法检测各组细胞增殖情况及上清液中c AMP水平。确定高剂量(15%)甲亢宁胶囊含药血清抑制细胞增殖作用最强后再将FRTL-5细胞分为正常组(15%空白大鼠血清)、模型组(M22刺激24 h+15%空白大鼠血清)和中药组(M22刺激24 h后15%甲亢宁胶囊含药血清干预24 h),透射电镜下观察各组细胞内自噬体的变化,Western blot检测各组细胞自噬相关LC3及Beclin1蛋白水平。结果 M22对FRTL-5细胞的增殖影响呈现明显量效关系,确定1μg/m L M22于24 h增殖作用最佳。与正常组比较,模型组FRTL-5细胞增殖活性明显增强(P 0. 01),细胞上清液中c AMP释放量增加(P 0. 01),自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1表达减少(P0. 01);与模型组比较,中药中剂量组和高剂量组FRTL-5细胞增殖被抑制(P 0. 01),上清液中c AMP释放量减少(P 0. 05,P 0. 01),中药低剂量组作用差异无统计学意义(P0. 05),中药组自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达均增高(P 0. 01)。透射电镜提示,模型组较正常组自噬小体的数量减少,而中药组较模型组增多。结论 M22可促进FRTL-5细胞增殖且导致细胞自噬异常,而中药甲亢宁胶囊可通过改善其自噬异常,进而发挥抑制FRTL-5细胞增殖的作用。