斑蝥提取物诱导宫颈癌细胞凋亡机制的实验研究

目的研究斑蝥提取物(cantharis extract,CTE)诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡作用及其分子机制。方法体外培养人宫颈癌细胞系Hela,利用CCK-8法检测CTE对Hela细胞增殖抑制作用;光学显微镜及荧光显微镜下观察不同浓度CTE诱导细胞凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞增殖和凋亡相关蛋白表达变化。结果 CTE显著抑制Hela细胞增殖,呈浓度及时间依赖型,处理48 h的IC50为3.94μg/mL。经光学显微镜下观察可见随着药物浓度增加细胞出现明显离巢凋亡。Hoechst 33258染色后发现,随着药物浓度的增加,核固缩、核碎裂等典型凋亡改变的细胞数目逐渐增多,呈浓度依赖型。AnnexinⅤ/PI双染流式凋亡检测示,随着药物浓度的增加凋亡细胞数量逐渐增加,药物处理组(1.25、2.5、5.0μg/mL)的凋亡率分别为14.73%、29.75%、53.33%;与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。Western blot检测显示,与对照组比较,药物处理组细胞增殖相关蛋白PCNA蛋白表达降低(P0.05);促凋亡蛋白Bax、Bak、Bid表达增加,2、5、5.0μg/mL组Bax表达及1.25、2.5、5.0μg/mL组Bid表达有效期异有统计学意义(P0.05)。而抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1、Survivin表达降低(P0.05),Bcl-XL表达无显著改变;凋亡蛋白激酶Caspase-3蛋白表达下降(P0.05),而Caspase-3底物凋亡相关蛋白PARP出现明显切割带,Cleaved-PARP蛋白表达增加(P0.05)。结论 CTE显著抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡,其可能机制与下调抗凋亡蛋白、上调促凋亡相关蛋白表达相关。