反式维甲酸诱导大鼠关节软骨细胞的退变

目的:观察反式维甲酸(TRA)对体外培养大鼠软骨细胞的生长增殖、形态和软骨退变相关基因表达的影响。方法:取出生24hSD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。对照组软骨细胞于体积分数为10%的胎牛血清(FBS)的高糖DMEM培养基中进行培养,而TRA组是在对照组培养基的基础上加入10μmolTRA进行培养。培养24h后,观察细胞形态变化,MTT法检测两组细胞的增殖情况,Western Blot检测Ⅱ型胶原和MMP13的表达,DMMB法测定细胞中GAG的含量,定量PCR检测ADAMTS5,MMP9,A-can,Sox9,COLX和ALP的表达。结果:TRA组的软骨形态由原来的多角形变成长梭形,且TRA组抑制软骨细胞的增殖,同时下调基质蛋白Ⅱ型胶原,A-can,GAG含量及转录因子Sox9表达,上调MMP13,MMP9,ADAMTS5,COLX及ALP的表达。结论:TRA具有促进软骨退变的作用,可用于建立体外软骨退变模型。