党参CpGAPDH基因的克隆及表达分析

甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因为糖代谢过程中关键酶基因及常用内参基因。该研究以党参Codonopsis pilosula转录组数据库为基础,以马铃薯GAPDH基因为参照,同源克隆得到党参GAPDH基因,命名为CpGAPDH,基因开放阅读框(ORF)全长1 014 bp,编码337个氨基酸。生物信息学分析表明,CpGAPDH与其他物种GAPDH具有高度相似性,与马铃薯、丹参GAPDH亲缘关系较近,无信号肽,预测其定位于细胞质,且具多个磷酸化位点,结合保守结构域预测分析,该蛋白属于四聚体NAD结合酶超家族。原核表达分析发现重组工程菌可诱导表达出接近44.3 k Da的蛋白质,与理论相对分子质量基本相符。qRT-PCR分析显示CpGAPDH基因在不同组织及不同发育时期根系中相对表达量差异不显著,稳定性分析显示该基因表达较稳定,由此克隆得到了1个新的党参候选内参基因,为党参多糖合成相关基因的表达分析奠定了基础。