基于12S序列的蛤蚧LAMP快速鉴定方法 |
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引用本文: | 苏燕燕,邬兰,丁丹丹,马婷玉,杨俐,向丽,薛建平.基于12S序列的蛤蚧LAMP快速鉴定方法[J].中国中药杂志,2018(12). |
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作者姓名: | 苏燕燕 邬兰 丁丹丹 马婷玉 杨俐 向丽 薛建平 |
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作者单位: | 淮北师范大学生命科学学院;中国中医科学院中药研究所中药鉴定与安全性检测评估重点实验室 |
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摘 要: | 蛤蚧为我国名贵动物中药材,为建立蛤蚧的LAMP可视化检测方法,实现其与混伪品的高效特异鉴别,该研究通过MEGA 6.0分析蛤蚧与其13种混伪品共65条12S rRNA序列,在线设计LAMP引物,并优化扩增条件,考察反应灵敏度,对蛤蚧及其混伪品进行鉴别验证。结果表明,基于12S rRNA序列的蛤蚧及其13种混伪品均可通过BLAST比对准确区分。蛤蚧12S rRNA序列较为保守,10批次30条序列在引物设计区仅含2条单倍型和3个变异位点,成功设计了6条LAMP特异引物。64℃反应1 h,80℃灭活5 min,即可完成蛤蚧的可视化检测,最低检测浓度为5μg·L-1,高于传统PCR 2个数量级。该方法特异性强、灵敏度高、检测方便、反应时间短,且闭管操作,避免了污染,可实现蛤蚧与混伪品的快速可视化鉴别。
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