| Tiam1基因慢病毒表达载体构建及其在HT29细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 于莉娜,张庆玲,李新,丁彦青.Tiam1基因慢病毒表达载体构建及其在HT29细胞中的表达[J].实用医学杂志,2010,26(16). |
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| 作者姓名： | 于莉娜 张庆玲 李新 丁彦青 |
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| 作者单位： | 南方医科大学南方医院病理科,南方医科大学基础医学院病理学系,广东省分子肿瘤病理重点实验室,教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室,广州市,510515 |
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| 基金项目： | 国家高新技术研究发展计划(863计划)项目，国家自然科学基金，广东省科技计划重大专项 |
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| 摘 要： | 目的:构建Tiam1与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒表达载体,观察其在人结直肠癌HT29细胞中的表达.方法:通过酶切Tiam1/C1199HA质粒获得Tiam1 cDNA片段,并将其克隆到慢病毒载体表达质粒pCDF1-copGFP中,经酶切、测序鉴定.慢病毒表达质粒和包装质粒共转染293FT细胞,获得携带Tiam1和GFP融合基因的重组慢病毒.取病毒上清感染人结直肠HT29细胞株,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白及免疫细胞化学检测Tiam1在靶细胞中的表达.结果:重组慢病毒质粒pCDF1-Tiam1-copGFP酶切鉴定结果与目的基因条带吻合,克隆测序结果与NCBI收录的Tiam1基因序列(NM_003253)完全一致.重组慢病毒质粒可高效转染293FT细胞,病毒包装效率为88.34%.收获慢病毒上清可高效感染HT29细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光,感染效率为55.89%,感染后靶细胞中Tiam1稳定高表达.结论:成功构建了携带Tiam1与GFP融合基因的慢病毒表达栽体pCDF1-Tiam1-copGFP,并使目的基因在靶细胞中得到稳定表达,为进一步研究Tiam1基因的相关功能提供了优质的稳定转染载体.
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| 关 键 词： | Tiam1基因 慢病毒载体 基因转染 |
Construction of recombinant lentiviral vector carrying Tiam1 gene and Tiam1 gene expression in HT29 cells |
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| YU Li-na,ZHANG Qing-ling,Li Xin,DING Yan-qing.Construction of recombinant lentiviral vector carrying Tiam1 gene and Tiam1 gene expression in HT29 cells[J].The Journal of Practical Medicine,2010,26(16). |
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| Authors: | YU Li-na ZHANG Qing-ling Li Xin DING Yan-qing |
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