| 人Qki-5基因重组腺病毒的制备 |
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| 引用本文： | 白丽园,于芳,傅海燕,杨国栋,张杰,晋亮,卢兹凡.人Qki-5基因重组腺病毒的制备[J].细胞与分子免疫学杂志,2008,24(6):644-646. |
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| 作者姓名： | 白丽园 于芳 傅海燕 杨国栋 张杰 晋亮 卢兹凡 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710032 |
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| 摘 要： | 目的:构建针对Qki-5人重组腺病毒表达载体,并在能在转染该病毒的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中观察到该基因过表达效果.方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-Qki-5-IRES-EGFP与骨架载体共转化到大肠杆菌BJ5183中,同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒.用获得的病毒感染Qki-5表达较低的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western blot方法检测细胞中基因表达的变化.结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对Qki-5基因的重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR和Western blot方法证实,在MDA-MB-231细胞中,Qki-5基因在mRNA和蛋白水平均有上升.结论:Qki-5腺病毒载体够建成功并且可以在乳腺癌细胞MDA-MB-231内表达.
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| 关 键 词： | Qki-5 腺病毒 乳腺癌 基因重组 乳腺癌细胞 蛋白水平 mRNA 法证 载体构建 酶切鉴定 限制性内切酶 结果 变化 基因表达 检测 Western blot 总蛋白 感染 颗粒 包装 毒载体 同源重组 |
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