成年大鼠破骨细胞体外培养及细胞凋亡的观察

目的　为研究骨重建过程中破骨细胞的关键作用，建立成年大鼠（１２ ～５０ 周龄） 破骨细胞的体外培养方法并进行细胞凋亡观察。方法　大鼠处死后，在无菌条件下取出股骨，剪去两骺端，以αＭＥＭ 将骨髓细胞冲洗出， 并离心洗细胞２ 次，置于αＭＥＭ 培养液，内含αＭＥＭ，体积分数为１０％ 的胎牛血清（ＦＣＳ） 和１α，２５（ＯＨ）２ Ｖｉｔ Ｄ３ １０ －８ ｍｏｌ／Ｌ，在２４ 孔板内，以体积分数为５ ％ 的ＣＯ２ ，３７ ℃，培养８ 天。按原位ＤＮＡ 末端标记（ＴＵＮＥＬ）检测试剂盒方法染色细胞，以荧光显微镜观察细胞凋亡。结果　经活体观察、ＨＥ染色、抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ） 染色，光学显微镜、扫描电镜观察骨片之陷窝的形成，证实培养的细胞为破骨细胞；ＴＵＮＥＬ 检测，荧光显微镜下可见破骨细胞核染色质浓缩、裂解等凋亡细胞的典型变化与未凋亡的破骨细胞。结论　本实验建立了成年大鼠破骨细胞的体外培养方法并进行细胞凋亡观察。