| 人B7-H1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定 |
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| 引用本文： | 张华欣,段文元,白云,黄钢. 人B7-H1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定[J]. 第三军医大学学报, 2005, 27(22): 2197-2200 |
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| 作者姓名： | 张华欣 段文元 白云 黄钢 |
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| 作者单位： | 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的利用基因工程手段构建hB7-H1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白.方法 PCR方法从活化的人T细胞cDNA文库中扩增编码人B7-H1膜外区的cDNA序列, 将其与人IgG1Fc和pCI-neo片段连接,构建成hB7-H1-Fc重组表达载体.用脂质体法转染CHO细胞, 夹心ELISA法检测上清中融合蛋白hB7-H1-Fc的表达,经Protein A 亲合层析纯化,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物. 结果 PCR扩增得到编码人B7-H1膜外区的727 bp基因片段,与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pCI-neo表达质粒.重组质粒转染CHO细胞后, 夹心ELISA法检测显示培养上清中有hB7-H1-Fc蛋白表达.纯化后的hB7-H1-Fc蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定其分子质量约51.76×103,与理论预测值相符. 结论成功构建了hB7-H1-Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白,为进一步研究B7-H1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | B7-H1-Fc 基因工程 真核表达 |
| 文章编号： | 1000-5404(2005)22-2197-04 |
| 收稿时间： | 2005-06-08 |
| 修稿时间： | 2005-09-25 |
Construction, expression and identification of human B7-H1-Fc chimeric molecule in mammalian CHO cell |
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| ZHANG Hua-xin,DUAN Wen-yuan,BAI Yun,HUANG Gang. Construction, expression and identification of human B7-H1-Fc chimeric molecule in mammalian CHO cell[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2005, 27(22): 2197-2200 |
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| Authors: | ZHANG Hua-xin DUAN Wen-yuan BAI Yun HUANG Gang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | B7-H1-Fc |
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