体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞的分化

背景：目前骨髓间充质干细胞已经应用于多种组织血管的修复，但涉及尿道血管组织的报道甚少。 目的：探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-07/2008-01在苏州大学附属儿童医院儿科研究所完成。 材料：清洁级4周龄SD大鼠4只，由苏州大学实验动物中心提供。作为诱导剂的血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞因子为Sigma公司产品。 方法：密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，待细胞达80%~90%融合时消化传代。传至第3代，细胞按1×109 L-1密度接种，加入含血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞因子的DMEM培养基向血管内皮细胞诱导分化。 主要观察指标：MTT测定细胞生长曲线，免疫荧光法检测细胞表面CD44与Vimentin的表达，光学倒置显微镜下观察诱导后细胞形态变化，电镜观察细胞超微结构。 结果：骨髓间充质干细胞生长曲线呈倒“S”型，第3 代细胞表面CD44和Vimentin表达阳性率分别为89.3%和85.6%。向血管内皮细胞诱导1~3 d细胞呈梭形或纺锤形，7 d后变成不规则的圆形或椭圆形，胞浆淡染，胞核较大，核染色质粗，且部分细胞死亡，14 d后整瓶细胞呈漩涡状生长，21~25 d后细胞密集处呈内皮细胞特有的铺路石样排列。诱导后第21天，细胞浆内可见微管、微丝及W-P小体。 结论：血管内皮细胞生长因子与碱性成纤维细胞因子联合诱导条件下，骨髓间充质干细胞在体外可分化为血管内皮细胞。

Differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells into vascular endothelial cells in vitro