| EBI3蛋白基因克隆、表达及其初步鉴定 |
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| 引用本文： | 廖法学,彭丽娜,张平平,杨帆,刘慧敏,陈伟,梁坤,张玉侠,沈际佳.EBI3蛋白基因克隆、表达及其初步鉴定[J].安徽医科大学学报,2010,45(1):1-5. |
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| 作者姓名： | 廖法学 彭丽娜 张平平 杨帆 刘慧敏 陈伟 梁坤 张玉侠 沈际佳 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学七年制临床医学专业,合肥,230032;安徽医科大学生物技术专业,合肥,230032;安徽医科大学基础医学专业,合肥,230032;安徽医科大学病理生理学教研室,合肥,230032;安徽医科大学病原生物学教研室和安徽省病原生物学重点实验室,合肥,230032 |
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| 基金项目： | 安徽医科大学七年制临床医学专业2008年"早期接触科研"训练计划立项制项目，安徽省自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 进一步研究EB病毒诱导基因3(EBI3)蛋白在病原生物感染宿主中的功能,探讨原核表达小鼠EBI3蛋白并初步鉴定.方法 收集日本血吸虫感染的C57/BL6小鼠脾细胞后提取总RNA,利用所合成引物经RT-PCR获得EBI3的cDNA,将该基因亚克隆入原核表达载体pET32a(+) ,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21株, 经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对包涵体进行变性、纯化和复性后获得可溶性的小鼠重组EBI3蛋白,用Western blot对其鉴定.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠获取血清,经饱和硫酸铵法和DEAE-Sephadex A-50柱纯化得到抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,ELISA检测其免疫活性.结果 基因工程获得目的 蛋白变性复性成功后经Western blot鉴定证实为小鼠重组EBI3蛋白,免疫小鼠后取血清,分离纯化获得抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,ELISA结果表明该蛋白具有免疫原性.结论 成功地表达了小鼠重组EBI3蛋白,并制备了抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,为进一步研究EBI3蛋白在病原生物感染宿主中的功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 基因表达 |
Cloning,expression and identification of EBI3 |
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| Liao Faxue,Peng Lina,Zhang Pingping,et al.Cloning,expression and identification of EBI3[J].Acta Universitis Medicinalis Anhui,2010,45(1):1-5. |
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| Authors: | Liao Faxue Peng Lina Zhang Pingping |
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| Institution: | Liao Faxue,Peng Lina,Zhang Pingping,et al(Seven-year Clinical Medicine Program,The First Clinical College of Anhui Medical University,Hefei 230032) |
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| Abstract: | Objective To research further on the function of EBI3 protein in hosts infected by pathogenic organism,the mice EBI3 protein genes were cloned and expressed in the prokaryotic cell.Methods EBI3 cDNA was amplified by RT-PCR from the total RNA isolated from the splenocytes of C57/BL6 mice infected by Schistosoma japomicum.EBI3 was subcloned into prokaryotic plasmid pET32a(+)vector to form EBI3-pET32a(+)which was then transformed into E.coli BL21(D3)for expression under induction of IPTG.A denaturation,purific... |
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| Keywords: | gene expression |
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