结核分枝杆菌热休克蛋白HtpG基因的原核表达与鉴定

目的 克隆并表达结核分枝杆菌 ＨｔｐＧ 分子,并鉴定其免疫反应性。 方法 采用聚合酶链式反应扩增结核分枝杆菌 Ｈ３７Ｒａ ＨｔｐＧ 基因,并克隆至 ｐＥＴ２２ｂ 质粒,测序筛选到重组成功的质粒。 重组质粒ｐＥＴ２２ｂ － ＨｔｐＧ 转化大肠埃希菌 ＢＬ２１（ＤＥ３）,表达的 ＨｔｐＧ 重组蛋白通过镍柱纯化。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定表达蛋白,并使用 ＨｔｐＧ 重组蛋白经 ＥＬＩＳＡ 法检测肺结核患者血清特异性抗体水平。 结果 成功构建了 ｐＥＴ２２ｂ－ ＨｔｐＧ 重组质粒; 在大肠埃希菌中表达出分子质量约 ７３ｋＤａ 的重组蛋白。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定该重组蛋白具有良好免疫反应性,ＥＬＩＳＡ 法检测肺结核患者血清中存在特异性抗 ＨｔｐＧ 抗体。 结论 在大肠埃希菌内成功表达 ＨｔｐＧ 重组蛋白,为将该蛋白用于结核免疫诊断试剂的研制奠定了基础。