| TLR4胞外段在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及鉴定 |
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| 引用本文： | 段朝霞,蒋建新,杨清武,张道杰,陈永华,朱佩芳.TLR4胞外段在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及鉴定[J].免疫学杂志,2003,19(4):274-277. |
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| 作者姓名： | 段朝霞 蒋建新 杨清武 张道杰 陈永华 朱佩芳 |
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| 作者单位： | 第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室,重庆,400042 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划项目 (G19990 5 4 2 0 3)，国家自然科学基金 (30 170 96 8)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的：构建谷胱甘肽转硫酶-TLR4融合蛋白表达载体，并研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达。方法：利用PCR从含TLR4全长cDNA序列的质粒中扩增其胞外段，约1800bp，然后将其克隆入pMD18-T载体中。测序确证后重组入谷胱甘肽转硫酶融合表达载体pGEX-4T-1中，并用IPTG诱导其在大肠杆菌中表达。结果：PCR扩增的TLR4胞外区基因序列与GenBank数据库中的序列一致。重组质粒经酶切鉴定及测序证实，TLR4基因已正确插入到pGEX-4T-1中。重组表达质粒转化感受态大肠杆菌HBl01后用IPTG诱导，获得Mr92 000的GST-TLR4融合蛋白；37℃，O.2mmol／L IPTG诱导4h，SDS-PAGE电泳后，经薄层凝胶扫描分析该融合蛋白占菌体蛋白总量34．25％，部分以包涵体存在，可溶性蛋白约占27．84％；亲和层析纯化后纯度大于90％。Western-blot证实GST-TLR4融合蛋白能与TLR4单抗特异性结合。结论：成功地构建融合蛋白表达载体pGEX-TLR4，并在大肠杆菌中获得有效表达，获得了纯度大于90％的可溶性GSI-TLR4融合蛋白，为进一步研究其功能及制备TLR4单克隆抗体奠定了基础。
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| 关 键 词： | TLR4 大肠杆菌 可溶性表达 纯化 鉴定 |
| 文章编号： | 1000-8861(2003)04-0274-04 |
| 修稿时间： | 2002年9月28日 |
Identification, purification and soluble expression of TLR4 extra-cellular fragment in Escherichia coli |
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| DUAN Zhao-xia,JIANG Jian-xin,YANG Qing-wu,ZHANG Dao-jie,CHEN Yong-hua,ZHU Pei-fang.Identification, purification and soluble expression of TLR4 extra-cellular fragment in Escherichia coli[J].Immunological Journal,2003,19(4):274-277. |
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| Authors: | DUAN Zhao-xia JIANG Jian-xin YANG Qing-wu ZHANG Dao-jie CHEN Yong-hua ZHU Pei-fang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | TLR4 Fusion protein Soluble expression Purification |
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