| 抗人肺癌噬菌体展示可溶性ScFv的筛选与鉴定及其序列测定 |
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| 引用本文： | 岳文涛,赖百塘,张春燕,湛秀萍.抗人肺癌噬菌体展示可溶性ScFv的筛选与鉴定及其序列测定[J].中华肿瘤防治杂志,2009,16(19). |
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| 作者姓名： | 岳文涛 赖百塘 张春燕 湛秀萍 |
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| 作者单位： | 北京市结核病胸部肿瘤研究所,北京肿瘤分子生物学实验室肺癌分室,细胞生物学实验室,北京101149 |
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| 基金项目： | 北京市肿瘤分子生物学重点实验室肺癌分室资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:制备抗人肺癌单链抗体(single chain Fv ferment antibody,ScFv),并对抗体生物学特性进行初步研究.方法:以人肺腺癌细胞系A2为抗原,对5 F-11杂交瘤细胞噬茵体抗体库进行富集和筛选.以人肺腺癌细胞系A2和正常人淋巴细胞为抗原,进行酶联免疫吸附试验,从富集后的噬菌体抗体库中筛选出只与A2细胞结合的阳性克隆.筛选的噬茵体克隆转染大肠埃希茵HB2151,得到可溶性单链抗体分泌克隆.可溶性抗体分泌克隆测序.应用 ELISA、竞争性ELISA、SDS-PAGE及蛋白质印迹法对其中的2A7-1克隆进行初步鏊定.结果:以肺腺癌细胞A2为抗原进行了4轮富集.进一步筛选得到18个仅识别A2细胞而与人淋巴细胞无反应的融合抗体分泌克隆.转染大肠埃希茵HB2151后筛选到能与A2细胞特异结合的可溶性抗体分泌克隆2A7-1.竞争性ELISA结果显示,5F-11能强烈抑制2A7-1与A2细胞的结合.SDS-PAGE蛋白质印迹法显示得到大小约为30×103的单链抗体.结论:通过噬菌体抗体技术成功分离到了鼠单抗5F-11的可溶性ScFv分泌克隆,为进一步的抗体应用研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 细菌噬菌体 抗体 单克隆 肺肿瘤 腺癌 |
Production and characterization of soluble phage display single chain variable fragment of monoclonal antibody |
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| YUE Wen-tao,LAI Bai-tang,ZHANG Chun-yan,ZHAN Xiu-ping.Production and characterization of soluble phage display single chain variable fragment of monoclonal antibody[J].Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment,2009,16(19). |
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| Authors: | YUE Wen-tao LAI Bai-tang ZHANG Chun-yan ZHAN Xiu-ping |
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