| 葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 郑宏庭,邓华聪,蹇锐,兰丽珍,方芳.葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定[J].第三军医大学学报,2004,26(16):1439-1441. |
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| 作者姓名： | 郑宏庭 邓华聪 蹇锐 兰丽珍 方芳 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学第一附属医院内分泌科,重庆,400016;重庆医科大学第一附属医院内分泌科,重庆,400016;重庆医科大学第一附属医院内分泌科,重庆,400016;重庆医科大学第一附属医院内分泌科,重庆,400016;重庆医科大学第一附属医院内分泌科,重庆,400016 |
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| 摘 要： | 目的构建葡萄糖激酶(glucokinase,GK)基因逆转录病毒表达载体及稳定的产毒细胞系,为将GK基因应用于糖尿病的基因治疗打下基础.方法质粒pCMV4-GKZ1经EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体PLXSN,构建成重组逆转录病毒表达载体PLX-GK,采用酶切及测序对重组体进行鉴定.而后脂质体转染PLX-GK至包装细胞PA317,检测培养上清病毒滴度,挑选滴度较高的稳定产毒细胞系并对其行PCR及免疫组化鉴定.结果构建了GK基因逆转录病毒表达载体PLX-GK,经酶切及序列分析证实目的基因插入位点和读码框架正确、无突变;建立了稳定产毒细胞系PA317/GK,其培养上清平均病毒滴度为6.8×105cfu/ml,最高为1.8×106cfu/ml,PCR及免疫组化证实GK基因整合入PA317/GK细胞基因组并有GK的表达.结论成功构建了携GK基因的逆转录病毒表达载体及高滴度的稳定产毒细胞系.
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| 关 键 词： | 葡萄糖激酶基因 逆转录病毒载体 |
| 文章编号： | 1000-5404(2004)16-1439-03 |
| 修稿时间： | 2004年1月7日 |
Construction and identificationof a retroviral vector containing GK gene and its package cell line |
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| ZHENG Hong ting,DENG Hua cong,JIAN Rui,LAN Li zhen,FANG Fang.Construction and identificationof a retroviral vector containing GK gene and its package cell line[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2004,26(16):1439-1441. |
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| Authors: | ZHENG Hong ting DENG Hua cong JIAN Rui LAN Li zhen FANG Fang |
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| Keywords: | GK gene retroviral vector |
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