| 含绿色荧光蛋白报告基因rhPDGF-BB非融合型表达载体的构建及其转染 |
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| 引用本文： | 张绍敏,毋中明,宋丹,李兰英,于德民. 含绿色荧光蛋白报告基因rhPDGF-BB非融合型表达载体的构建及其转染[J]. 天津医药, 2008, 36(7) |
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| 作者姓名： | 张绍敏 毋中明 宋丹 李兰英 于德民 |
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| 作者单位： | 卫生部及天津市激素与发育重点实验室,天津医科大学代谢病医院,300070 |
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| 基金项目： | 中国博士后科学基金，天津市卫生局资助项目 |
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| 摘 要： | 目的：构建并转染含绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的重组人血小板衍化生长因子-BB（rhPDGF-BB）非融合型表达载体，为采用转基因工程化细胞修复糖尿病溃疡创面奠定基础。方法：从人脐静脉内皮细胞human umbil ical vein endothelial cell，HUVEC）中分离总RNA，行RT—PCR获得rhPDGF—BB cDNA，构建克隆质粒pMD 19-T／rhPDGF—BB，经测序正确后，再将该目的片段与真核表达载体pSELECT—GFPzeo—mcs连接，转化E．coli DH 5α感受态菌落筛选得到含GFP报告基因的非融合型表达载体，然后将其转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）并用免疫组化染色法鉴定。结果：PCR获得长度为681bp的目的片段，经pSELECT-GFPzeo—mcs载体连接、筛选及序列分析后，证实所插入目的片段与GenBank检索的rhPDGF-BB cDNA序列（NM-033016）完全匹配。结论：成功构建了非融合型表达载体pSELECT-GFPzeo—mes／rhPDGF-BB，并实现了rhPDGF-BB基因在CHO的表达。
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| 关 键 词： | 遗传载体 绿色荧光蛋白质类 仓鼠 卵巢 转染 |
Construction and Transduction of the Non-Fusion Expression Vector pSELECT-GFPzeo-mcs/rhPDGF-BB with Green Fluorescent Protein |
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| ZHANG Shaomin,WU Zhongming,SONG Dan,LI Lanying,YU Demin. Construction and Transduction of the Non-Fusion Expression Vector pSELECT-GFPzeo-mcs/rhPDGF-BB with Green Fluorescent Protein[J]. Tianjin Medical Journal, 2008, 36(7) |
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| Authors: | ZHANG Shaomin WU Zhongming SONG Dan LI Lanying YU Demin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | genetic vectors green fluorescent proteins hamster ovary transfection |
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