| 一种新的GFP/DNA双标记流式细胞技术 |
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| 引用本文： | 董波,饶亚岚,鲁茁壮,王澜,从玉文,陈肖华,张军权,高荣莲,王治东,毛秉智.一种新的GFP/DNA双标记流式细胞技术[J].军事医学科学院院刊,2004,28(6):565-568,597. |
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| 作者姓名： | 董波 饶亚岚 鲁茁壮 王澜 从玉文 陈肖华 张军权 高荣莲 王治东 毛秉智 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850 |
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| 基金项目： | 全军“十五”指令性基金课题 (0 1L0 18) |
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| 摘 要： | 目的：为了检测细胞转染了带绿色荧光蛋白(GFP)标记的融合基因后细胞周期的改变，以研究目的基因与细胞周期的关系，建立GFP／DNA双标记流式细胞技术。方法：①以小鼠脾细胞为模型，以不同浓度的多聚甲醛(PFA)预固定细胞不同时间，再换用70％乙醇固定细胞24h以上，观察不同固定方法对细胞周期检测的影响；②以Ad-EGFP感染的Hep-2细胞为模型，观察不同固定方法对细胞周期、GFP阳性细胞检出率和GFP的荧光强度的影响；③用最佳固定方法观察转染p21／WAF1／CIP1-EGFP融合基因的293细胞的细胞周期，以验证方法的可靠性。结果：0．5％PFA预固定60min，再换用70％乙醇固定细胞，不影响细胞周期检测，而且GFP荧光强度和转染效率的检测最佳。以此方法固定细胞，GFP／DNA双标记流式细胞技术检测了转染p21／WAF1／CIP1-EGFP融合基因的293细胞的细胞周期，可观察到p21表达阳性的细胞发生了G0／G1期阻滞。结论：优化的细胞固定方法可以有效地阻止GFP从细胞内流出，建立的GFP／NDA双标记流式细胞技术可以用于研究带GFP标签的基因表达蛋白与细胞周期的关系。
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| 关 键 词： | 细胞周期 流式细胞术 绿色荧光蛋白 基因表达 转染 |
| 文章编号： | 1000-5501(2004)06-0565-05 |
A new GFP/DNA multi-parameter flow cytometry |
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| DONG Bo,RAO Ya-Lan,LU Zhuo-Zhuang,WANG Lan,CONG Yu-Wen,CHEN Xiao-Hua,ZHANG Jun-Quan,GAO Rong-Lian,WANG Zhi-Dong,MAO Bing-Zhi.A new GFP/DNA multi-parameter flow cytometry[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2004,28(6):565-568,597. |
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| Authors: | DONG Bo RAO Ya-Lan LU Zhuo-Zhuang WANG Lan CONG Yu-Wen CHEN Xiao-Hua ZHANG Jun-Quan GAO Rong-Lian WANG Zhi-Dong MAO Bing-Zhi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cell cycle flow cytometry green fluorescent protein gene expression transfection |
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