稳定表达犬转铁蛋白受体CHO细胞系的建立和鉴定

目的 构建犬转铁蛋白受体（transferrin receptor, TfR）的真核表达载体，转染中国仓鼠卵巢CHO细胞，建立稳定表达犬TfR的CHO-TfR 细胞系。方法 从犬腺细胞系（WRD）提取总RNA，逆转录合成 cDNA，采用PCR方法扩增TfR 基因，将其克隆至真核表达载体pCDNA3，酶切和测序鉴定；利用脂质体法转染CHO细胞，通过RT-PCR、Western blot 及免疫荧光法检测TfR的表达。结果 构建的pCDNA3-TfR 重组质粒经过酶切和测序鉴定，TfR 基因序列成功插入到pCDNA3载体，且无突变。转染CHO细胞后，RT-PCR、Western blot 及免疫荧光法检测TfR表达阳性，成功建立了稳定表达犬TfR的CHO-TfR 细胞系。HTH]结论 成功构建了真核表达载体pCDNA3-TfR ，并获得了稳定表达TfR的CHO-TfR 细胞系。