实时荧光PCR方法分型检测细菌16S rRNA基因的临床应用 |
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引用本文: | 潘克女,张永乐,徐爱芳,王琴,刘苑,刘寿荣.实时荧光PCR方法分型检测细菌16S rRNA基因的临床应用[J].中国卫生检验杂志,2016(5):673-675. |
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作者姓名: | 潘克女 张永乐 徐爱芳 王琴 刘苑 刘寿荣 |
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作者单位: | 杭州市西溪医院;浙江省立同德医院 |
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基金项目: | 杭州市科技发展计划重点项目(2005633Q02) |
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摘 要: | 目的建立快速、准确、特异的检测细菌16S rRNA基因的实时荧光PCR法。方法根据Taq Man探针技术实时荧光PCR反应原理结合细菌16S rRNA基因序列,在高保守区域设计通用引物和特异性探针,对10种标准菌株及15种临床培养分离菌株进行PCR检测,优化反应体系,评价该方法的特异性、灵敏度、重复性,并对187份标本采用培养法和实时荧光PCR法进行检测比较。结果 10种标准株和15种临床培养株采用通用引物检测全阳性,9株革兰阳性菌株通过革兰阳性探针检测全阳性,16株革兰阴性菌株通过革兰阴性探针检测也全阳性。187例临床标本经实时荧光PCR检测阳性率为16.22%(30/185),培养法检出率为9.73%(18/185),2种方法革兰菌分型结果一致,细菌检出率前者明显高于后者,差异有统计学意义(P0.05)。结论多探针实时荧光PCR法检测细菌16S rRNA具有敏感性高、特异性强、方便快捷等特点,可在细菌感染性疾病中给临床医生提供更全面的病原学资料,早期指导抗生素的应用。
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关 键 词: | 实时荧光聚合酶链式反应 革兰阴性菌 革兰阳性菌 基因 |
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