| 弥漫性特发性骨质增生症骨化相关特异性miRNAs分析 |
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| 引用本文： | 赵晓涛,雪原,张殿英,董胜利,郁凯,李建鹏,杨忠.弥漫性特发性骨质增生症骨化相关特异性miRNAs分析[J].中华骨科杂志,2015,35(1):68-75. |
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| 作者姓名： | 赵晓涛 雪原 张殿英 董胜利 郁凯 李建鹏 杨忠 |
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| 作者单位： | 300450，天津市第五中心医院骨科(赵晓涛、张殿英、董胜利、郁凯、李建鹏、杨忠)；天津医科大学总医院骨科(雪原) |
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| 摘 要： | 目的 三维黏附培养下获得并分析弥漫性特发性骨质增生症(diffuse idiopathic skeletal hyperostosis，DISH)骨化相关特异性miRNAs。方法 2012年1月至2014年1月通过手术分别获取4份DISH患者骨化黄韧带组织块与4份创伤患者正常黄韧带组织块，采用胶原酶消化法分离组织块中成纤维细胞，在人完全脱细胞羊膜(human acellular amniotic membrane，HAAM)上培养，收获前进行细胞免疫荧光鉴定；提取细胞总RNA并检测其质量，通过YM-100 (Millipore) 微离心过滤柱得到片段< 300 nt的小RNA，采用μParaflo? miRNA微阵列基因表达实验和分析技术分析miRNAs表达谱，对结果中部分差异miRNAs进行qRT-PCR验证；采用PicTar 2005、miRanda v5、TargetScan 5.1软件预测靶基因；使用Gene Ontology进行靶基因功能注释，基于KEGG Pathway数据库分析靶基因所参与的骨化相关信号传导通路；使用TRANSFAC 7.0 public转录因子数据库及Patser预测程序预测转录因子结合位点。结果 成纤维细胞在HAAM上生长时形态保持良好，呈簇状分布，复层生长并建立起细胞间联系； 免疫荧光鉴定发现DISH组细胞骨钙素和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原呈阳性，正常组细胞Ⅰ和Ⅲ型胶原呈阳性；共获得15种信号比值>1.5倍差异表达的miRNAs，12种上调、3种下调，qRT-PCR验证结果与微阵列芯片检测结果一致；共预测出 67个靶基因，影响细胞分化、黏附及矿物质沉积等活动，参与MAPK、Wnt、TGF-β、Focal adhesion等多个骨化相关信号途径，预测出10种差异性miRNAs的转录因子。结论 HAAM可实现成纤维细胞在体外三维黏附下生长，部分miRNAs的异常表达可能参与DISH发病。
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| 关 键 词： | 微RNAs 黄韧带 骨化 异位性 微阵列分析 |
| 收稿时间： | 2014-07-20; |
The diffuse idiopathic skeletal hyperostosis related miRNAs analysis |
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| Zhao Xiaotao,Xue Yuan,Zhang Dianying,Dong Shengli,Yu Kai,Li Jianpeng,Yang Zhong.The diffuse idiopathic skeletal hyperostosis related miRNAs analysis[J].Chinese Journal of Orthopaedics,2015,35(1):68-75. |
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| Authors: | Zhao Xiaotao Xue Yuan Zhang Dianying Dong Shengli Yu Kai Li Jianpeng Yang Zhong |
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| Institution: | *Department of Orthopaedic Surgery, The Fifth Central Hospital of Tianjin, Tianjin 300450, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | MicroRNAs Ligamentum flavum Ossification heterotopic Microarray analysis |
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