液滴式数字PCR与实时荧光定量PCR检测利什曼原虫的方法比较 |
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引用本文: | 陈维琳,侯杰,王念,马莹.液滴式数字PCR与实时荧光定量PCR检测利什曼原虫的方法比较[J].中国人兽共患病杂志,2023(10):986-992+1031. |
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作者姓名: | 陈维琳 侯杰 王念 马莹 |
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作者单位: | 四川大学华西医院实验医学科 |
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基金项目: | 国家科技重大项目(No.2020AAA0109405)~~; |
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摘 要: | 目的 建立内脏利什曼病液滴式数字PCR检测方法,将其与同时建立的实时荧光定量PCR检测方法进行方法学比较,探究其在内脏利什曼病诊断方面的价值。方法 以杜氏利什曼原虫小环动基体DNA(kinetoplast DNA,kDNA)为分子靶标,根据其约200 bp的保守片段设计引物和探针,建立内脏利什曼病液滴式数字PCR检测方法,比较其与实时荧光定量PCR检测方法的检测限、精密度以及在不同利什曼原虫虫株中的检测效果。结果 液滴式数字PCR检测下限与实时荧光定量PCR检测下限相同,约为1.0×10 copies/μL;随待测样本浓度的降低(1.0×104 copies/μL~1.0×10 copies/μL),液滴式数字PCR检测方法变异系数呈增大趋势(12.07%~62.96%),重复性越差;实时荧光定量PCR变异系数较小(2.96%~4.26%),且不同浓度之间的变异系数差别不大。2种方法在不同利什曼原虫中的检测灵敏度不同。结论 和实时荧光定量PCR相比,液滴式数字PCR在利什曼原虫检测中的灵敏度和重复性没有表现出显著的优势,后续还需更多的研究从分子靶标的选择、灵敏度、...
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关 键 词: | 利什曼原虫 液滴式数字PCR 实时荧光定量PCR |
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