| 柯萨奇病毒B组5型VP1蛋白的外源表达及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 金维维,陈 伟,庞 冉,张同禹,井申荣.柯萨奇病毒B组5型VP1蛋白的外源表达及多克隆抗体的制备[J].中国免疫学杂志,2019,35(4):463-466. |
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| 作者姓名： | 金维维 陈 伟 庞 冉 张同禹 井申荣 |
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| 作者单位： | 昆明理工大学医学院 |
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| 基金项目： | 病毒学国家重点实验室开放研究基金资助项目(2018KF006);昆明理工大学2018年学生课外学术科技创新基金课题(2018BA311) |
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| 摘 要： | 目的:原核表达柯萨奇病毒B组5型的VP1蛋白,并制备其多克隆抗体及检测。方法:提取在Vero细胞中柯萨奇病毒B组5型的RNA,通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增获取VP1基因序列,构建原核表达载体,大量诱导表达重组VP1蛋白。用His Trap HP亲和层析柱纯化重组蛋白,以纯化的目的蛋白为抗原,免疫雄性SD大鼠获得VP1蛋白多克隆抗体血清,ELISA测定该抗体的效价,微量中和实验测定抗体的中和活性,Western blot检测抗体的特异性,免疫组化检测抗体对组织中抗原的识别。结果:成功构建了VP1-pET-28a重组载体,并且在BL21细胞中成功诱导表达,亲和层析柱纯化后蛋白纯度大于90%。ELISA测得抗体的效价为1∶128 000,微量中和实验显示抗体没有中和活性,Western blot分析显示抗体能与CVA16和EV71交叉反应,免疫组化实验表明抗体能够识别组织中的CVB5抗原。结论:本研究成功制备了CVB5 VP1蛋白的高效价的多克隆抗体,为CVB5病毒疫苗和病毒诊断的研发提供了有效的工具。
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| 关 键 词： | 柯萨奇病毒B组5型 VP1蛋白 多克隆抗体 免疫组化 |
Prokaryotic expression of coxsackievirus B5 VP1 protein and preparation of polyclonal antibodies |
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| JIN Wei-Wei,CHEN Wei,PANG Ran,ZHANG Tong-Yu,JING Shen-Rong.Prokaryotic expression of coxsackievirus B5 VP1 protein and preparation of polyclonal antibodies[J].Chinese Journal of Immunology,2019,35(4):463-466. |
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| Authors: | JIN Wei-Wei CHEN Wei PANG Ran ZHANG Tong-Yu JING Shen-Rong |
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| Institution: | (Medical School,Kunming University of Science and Technology,Kunming 650500,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Coxsackievirus B5 VP1 protein Polyclonal antibody Immunohistochemistry |
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