乌药挥发油通过AMPK/mTOR信号通路诱导胃癌AGS细胞凋亡和自噬

目的 研究乌药挥发油对人胃癌细胞AGS凋亡和自噬的的影响，并探讨腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在其中的调控作用。方法 利用水蒸气蒸馏法提取乌药挥发油，采用噻唑蓝（MTT）比色法检测乌药挥发油对人胃癌细胞AGS细胞活力的影响，并根据半抑制浓度（IC₅₀）确定最佳给药浓度与时间，用于后续研究；设置空白组、乌药挥发油低、中、高质量浓度组（0、15、30、60 mg·L^-1）及阳性药环磷酰胺（CTX）组（350 mg·L^-1）。用不同浓度的乌药挥发油处理AGS细胞48 h，采用细胞集落形成实验检测细胞增殖能力的变化、流式细胞仪检测细胞周期的变化、细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化、苏木素-伊红（HE）染色观察细胞形态的变化、Annexin-V/碘化丙啶（PI）双染法检测AGS细胞凋亡率、吖啶橙（AO）染色观察自噬水平的变化、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测自噬效应蛋白Beclin-1、p62、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、B细胞淋巴瘤因子-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、剪切的多聚ADP-核糖聚合酶（cleaved PARP）、单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、雷帕霉素机械靶蛋白（mTOR）及磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达水平的变化。结果 与空白组比较，AGS细胞经乌药挥发油干预24、48 h，细胞活性被明显抑制（P<0.05，P<0.01），呈浓度和时间依赖性；乌药挥发油各浓度组细胞增殖与迁移能力明显降低（P<0.05，P<0.01），且随浓度的上升抑制能力越明显；乌药挥发油将AGS细胞周期阻滞于G₂/M期（P<0.05，P<0.01），呈浓度依赖性；乌药挥发油各浓度组出现细胞圆化，体积变小并伴随凋亡小体形成等现象，细胞凋亡率明显增加（P<0.05，P<0.01）；随着乌药挥发油浓度的增加，自噬体数量增加致红色荧光逐渐增强，提示自噬水平的提升；乌药挥发油各浓度组Beclin-1、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、Bax/Bcl-2及AMPK蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01）；p62与p-mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 乌药挥发油通过调节AMPK/mTOR信号通路诱导AGS细胞凋亡和自噬介导的生长抑制。

Volatile Oil of Linderae Radix Induces Apoptosis and Autophagy of Gastric Cancer AGS Cells via AMPK/mTOR Signaling Pathway