| 人胚胎干细胞培养及其cDNA文库的构建 |
| |
| 引用本文： | 周素芳,Peter L Stern.人胚胎干细胞培养及其cDNA文库的构建[J].中国现代医学杂志,2007,17(17):2049-2053. |
| |
| 作者姓名： | 周素芳 Peter L Stern |
| |
| 作者单位： | 1. 广西医科大学 生物化学与分子生物学教研室,广西 南宁,530021
2. Cancer Research UK Immunology Group, Paterson Institute for Cancer Research, Christie Hospital NHS Trust, Manchester, UK. |
| |
| 摘 要： | 目的 构建人胚胎干细胞cDNA文库,为筛查疾病抗原基因奠定基础.方法 培养和收集人胚胎干细胞克隆,提取胚胎干细胞总RNA,分离纯化mRNA,利用mRNA作模板反转录合成双链cDNA,双链DNA经pfu-DNA聚合酶将链末端补平,与EcoRⅠ接头连接,XhoⅠ酶切消化产生粘端.用Sepharose CL2B柱分离纯化及除去小分子cDNA片段,与Uni-ZAP XR噬菌体连接,体外转化XL1-blue MRF菌,建成cDNA文库并计算重组效率.对cDNA文库进行扩增,测定扩增文库的滴度.阳性重组子用EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切鉴定插入片段的大小.结果 构建成含1.2×106重组子的人胚胎干细胞cDNA文库,重组子插入外源DNA片段长度不小于1000 kb.结论 已成功构建人胚胎干细胞cDNA文库,适合用于筛选目的基因克隆.
|
| 关 键 词： | 人胚胎干细胞 cDNA文库 分子克隆 |
| 文章编号： | 1005-8982（2007）17-2049-05 |
| 收稿时间： | 2007-03-05 |
| 修稿时间： | 2007-03-05 |
Construction and characterization of a cDNA library from human embryonic stem cells |
| |
| ZHOU Su-fang,Angela M Eastham,Peter L Stern.Construction and characterization of a cDNA library from human embryonic stem cells[J].China Journal of Modern Medicine,2007,17(17):2049-2053. |
| |
| Authors: | ZHOU Su-fang Angela M Eastham Peter L Stern |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | human embryonic stem cell eDNA library Molecular Cloning |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
