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人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3基因及其融合蛋白真核表达载体的构建和生物信息学分析
引用本文:陈治中,王晓蓓,王琳,毛晓露,陈凤花,刘峰,胡丽华. 人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3基因及其融合蛋白真核表达载体的构建和生物信息学分析[J]. 临床血液学杂志, 2011, 0(5): 569-573
作者姓名:陈治中  王晓蓓  王琳  毛晓露  陈凤花  刘峰  胡丽华
作者单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科;广西壮族自治区人民医院检验科;
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No:30672008)
摘    要:目的:构建T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3基因及其融合蛋白真核表达载体,并对TIM-3基因进行生物信息学分析。方法:采用Trizol法从人外周血单个核细胞提取总mRNA,利用两步法RT-PCR技术扩增TIM-3及其胞外(结构)域基因片段和人IgG1Fc基因片段。并将他们分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,通过PCR及测序进行鉴定。序列分析后将TIM-3胞外(结构)域基因片段亚克隆到已经克隆了人IgG1Fc基因片段真核表达载体pcDAN3.1(+)上;并通过PCR及双酶切进行鉴定。应用生物信息学初步分析TIM-3基因的物理化学性质、蛋白质结构域、功能。结果:成功从PBMC中提取并逆转录的cDNA扩增出TIM-3及其胞外(结构)域基因和人IgG1Fc基因;经PCR、酶切鉴定、测序分析表明它们与GenBank提供的序列信息完全相同。生物信息学分析结果表明TIM-3蛋白为稳定亲水性蛋白,有1个跨膜螺旋结构,相对分子量是33.4KD,等电点pI为5.54。该蛋白含约32.56%的α-螺旋,8.27%的延伸链,49.17%的不规则卷曲,1段21个氨基酸组成的信号肽。TIM-3蛋白亚细胞定位于内质网、高尔基体、液泡、细胞膜上。功能分析预测TIM-3蛋白具有受体和信号转导功能。结论:成功构建TIM-3基因及其融合蛋白真核表达载体,并利用生物分析软件对其进行生物信息学分析。了解TIM-3基因的性质特征,为进一步研究该基因奠定基础。

关 键 词:T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3基因  生物信息学分析  克隆  融合蛋白

Bioinformatics analysis and construction of eukaryotic expression vector of human TIM-3 gene and its fusion protein
CHEN Zhizhong WANG Xiaobei WANG Lin MAO Xiaolu CHEN Fenghua LIU Feng HU Lihua. Bioinformatics analysis and construction of eukaryotic expression vector of human TIM-3 gene and its fusion protein[J]. Journal of Clinical Hematology, 2011, 0(5): 569-573
Authors:CHEN Zhizhong WANG Xiaobei WANG Lin MAO Xiaolu CHEN Fenghua LIU Feng HU Lihua
Affiliation:CHEN Zhizhong WANG Xiaobei WANG Lin MAO Xiaolu CHEN Fenghua LIU Feng HU Lihua(Department of Clinical Laboratory,Union Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan,430022,China)
Abstract:Objective:To construct eukaryotic expression vector of human TIM-3 gene and its fusion protein,and conduct bioinformatics analysis of human TIM-3 gene.Method:Total RNA was extracted from human peripheral blood monouclear cells(PMBC),and human TIM-3 and its ectodomain as well as IgG1 Fc gene fragment were amplified with two-step RT-PCR technique.They were respectively cloned into the eukaryotic expression vector pcDNA3.1(+),confirmed by PCR and sequencing.Then the ectodomain of human TIM-3 gene was subcloned...
Keywords:T cells immunoglobulin mucin-3 gene  bioinformatics analysis  clone  fusion protein  
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