| 用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA |
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| 引用本文： | 李红钢,廖爱华,孔祥斌,胡廉,熊承良.用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA[J].男科学报,2007,13(11):969-974. |
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| 作者姓名： | 李红钢 廖爱华 孔祥斌 胡廉 熊承良 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院计划生育研究所,湖北武汉430030 |
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| 基金项目： | 国家“十五”科技攻关项目（2004BA720A33-01）;湖北省卫生厅科研基金项目（JX2803） |
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| 摘 要： | 目的：建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法：用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果：定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log（X）＋25.99和Y=-3.409log（X）＋24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论：用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。
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| 关 键 词： | CatSper1 精子 mRNA 实时逆转录-聚合酶链反应 人 小鼠 |
| 文章编号： | 1009-3591（2007）11-0969-06 |
| 收稿时间： | 2007-02-17 |
| 修稿时间： | 2007-07-25 |
Optimization of Real Time RT-PCR System for the Quantitative Estimation of CatSperl mRNA Levels in Human and Mouse Mature Spermatozoa |
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| Authors: | LI Hong-gang LIAO Ai-hua KONG Xiang-bin HU Lian XIONG Cheng-liang |
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| Keywords: | CatSper1 spermatozoa messenger RNA real time RT-PCR human mouse |
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