| 抗PIP5KL1多克隆抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 时岚,赵玫,时茜,方明镜,罗清,戴亚云,黄常志.抗PIP5KL1多克隆抗体的制备及鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(2). |
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| 作者姓名： | 时岚 赵玫 时茜 方明镜 罗清 戴亚云 黄常志 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所病因及癌变研究室分子肿瘤学国家蕈点实验室,北京,100021 |
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| 基金项目： | 国家重大科学研究项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建人4-磷酸-磷脂酰肌醇-5-激酶(phos-Dhatidylinosito1-4-phosphate 5-kinases-like 1,PIP5KL1)质粒并在大肠杆菌中表达,纯化得到相对分子质量(Mr)为42 000的融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备兔抗PIP5KL1多克隆抗体.方法:采用PCR的方法获得编码人PIP5KL1的cDNA序列,将其克隆入pET-32a,构建pET32a-PIP5KL1表达载体.在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导下表达6×His-融合蛋白,纯化后免疫新西兰兔,制备兔抗人PIP5KL1血清,以Western blot和ELISA方法分析其特异性和效价.结果:PIP5KL1融合蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体,West-em blot结果显示制备的抗体具有较高的特异性,ELISA显示效价为1:100 000.结论:获得了纯化的PIPSKL1融合蛋白和anti-PIP5KL1多抗血清,为今后对新基因PIP5KL1功能研究打下了基础.
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| 关 键 词： | 融合表达 抗体制备 |
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