C-反应蛋白对体外培养乳鼠心肌细胞的影响

目的：应用C-反应蛋白干预体外培养的乳鼠心肌细胞，观察C-反应蛋白对心肌细胞的影响。方法：实验于2005-05／10在南京医科大学第一附属医院心内科暨心血管病研究所完成。取新生1-3d的SD乳鼠，无菌操作取出心脏，去除大血管和心房后将心脏剪碎，加入适量0．125％胰蛋白酶反复消化至完全。所得消化液中加入含血清的DMEM培养基，离心后弃上清，沉淀用含0．1％Brdu、体积分数为0．15新生牛血清的DMEM培养基混悬。细胞密度稀释至6&;#215;10^8L^-1，接种至六孔板中，放入37℃，体积分数为0．05的CO2孵育箱内培养。24h后换液除去Brdu，取第3天细胞进行研究。采用充氮气孵育4h模拟缺氧造成心肌细胞损伤（缺氧组），以未缺氧组做对照，缺氧组与未缺氧组均加用不同浓度的C-反应蛋白（0，10，55，100mg／L）进行干预，测定细胞培养上清心肌肌钙蛋白Ⅰ的含量及脂质过氧化产物丙二醛与超氧化物歧化酶的含量以观察C-反应蛋白对心肌细胞的影响。并通过免疫组织化学观察C-反应蛋白在细胞的分布情况。结果：①细胞形态及搏动率的改变：未缺氧组细胞搏动率总体随C-反应蛋白浓度的增加而增加，但在缺氧4h组，细胞搏动率在C-反应蛋白55mg／L时达到最高峰[（132&;#177;9）次／min，P〈0．051。②培养细胞上清肌钙蛋白Ⅰ含量的变化：在未缺氧组和缺氧4h组，肌钙蛋白Ⅰ均随C-反应蛋白浓度的增加而增高，且C-反应蛋白浓度为100mg／L时的增幅最高[C-反应蛋白为0，10，55，100mg／L时的肌钙蛋白Ⅰ浓度：缺氧组分别为（0．789&;#177;0．066），（1．198&;#177;0．101），（1．979&;#177;0．151），（3．714&;#177;0．288）μg／L；未缺氧组分别为（0.332&;#177;0．034），（0．377&;#177;0．054），（0．527&;#177;0．057），（0．867&;#177;0．077）μg／L，P〈0．051。③细胞上清超氧化物歧化酶、丙二醛含量变化：各组丙二醛含量的变化趋势与肌钙蛋白Ⅰ相似，随C-反应蛋白浓度的增加而增加，而超氧化物歧化酶活力则随C-反应蛋白浓度的增加而降低。④免疫组织化学结果显示：随着C-反应蛋白浓度的增高，细胞着色变深，细胞密度变低，体积变小。相同C-反应蛋白浓度下，损伤组细胞的变化比未缺氧组更明显。结论：C-反应蛋白对心肌细胞具有显著的损伤作用，尤其在已有缺氧损伤的基础上。

Effect of C-reactive protein on myocardial cells in suckling mice cultured in vitro