温阳活血利水方调控Klotho/TRPC6/CatL通路稳定补体损伤足细胞骨架北大核心CSCD

目的体外观察温阳活血利水方含药血清对膜攻击复合物C5b-9介导的非致死性足细胞损伤的影响,探讨该方药治疗特发性膜性肾病(IMN)的疗效机制。方法体外组装C5b-9建立足细胞亚溶破模型,将足细胞分为正常对照组、模型组、他克莫司组、10%及20%含药血清组,并设他克莫司及中药血清空白对照组。激光共聚焦显微镜观测足细胞Klotho、瞬时受体电位通道(TRPC6)、组织蛋白酶L(CatL)及其底物Synaptopodin表达;采用荧光探针检测细胞内Ca^(2+)水平;活性定量检测试剂盒测定RhoA及Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)活性;Western Blot检测LIM结构域激酶1(LIMK1)、cofilin蛋白及其磷酸化蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组足细胞Klotho及Synaptopodin表达下调(P<0.01);TRPC6、CatL、Ca^(2+)、RhoA、ROCK、p-LIMK1/LIMK1及p-cofilin/cofilin表达上调(P<0.01);骨架微丝明显减少,排列紊乱。与模型组比较,各干预组足细胞Klotho与Synaptopodin的表达上调(P<0.01);而TRPC6、CatL、Ca^(2+)、RhoA、ROCK、p-LIMK1/LIMK1及p-cofilin/cofilin表达下调(P<0.01);中药血清和他克莫司均改善了足细胞骨架的重构。结论温阳活血利水方含药血清可能通过调控Klotho/TRPC6/CatL通路,从而稳定非致死性C5b-9介导的细胞骨架紊乱。