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AKT-糖原合成激酶-3β信号通路对SOD1G93A 突变N2a细胞的保护作用 |
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| 引用本文： | 陈燕春,管英俊,刘永新,周风华,刘焕彩,王巧真,马晓君,赵春艳.#br#
AKT-糖原合成激酶-3β信号通路对SOD1G93A 突变N2a细胞的保护作用[J].解剖学报,2016,47(4):433-441. |
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| 作者姓名： | 陈燕春 管英俊 刘永新 周风华 刘焕彩 王巧真 马晓君 赵春艳 |
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| 作者单位： | 1.潍坊医学院组织学与胚胎学教研室; 2.附属医院关节外科; 3.人体解剖学教研室， 山东 潍坊 261053 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81401066;81271413)，山东省自然科学基金(ZR2012HQ021)，山东省科技发展计划项目(2012GSF11827)，山东省教育厅课题(J11LF16 |
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| 摘 要： | 目的 探讨AKT-糖原合成激酶-3β(GSK-3β)信号通路对SOD1G93A突变N2a细胞的作用及机制。 方法 选取小鼠成神经瘤细胞系N2a，分别转染pEGFP-WT-SOD1和pEGFP-G93A-SOD1质粒，应用Western blotting和免疫荧光染色方法检测AKT、GSK-3β和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在细胞模型中的表达变化。应用RT-PCR和Western blotting技术检测siRNA沉默AKT后GSK-3β和cyclin D1在SOD1突变N2a细胞中的表达变化，通过MTS方法，检测细胞增殖和存活的改变。 结果 与pEGFP-WT-SOD1转染的N2a细胞比较，pEGFP-G93A-SOD1转染的N2a细胞中AKT及GSK-3β总蛋白在转染后24 h和48 h表达均无明显变化，p-AKT(Ser473)、p-GSK-3β(Ser9)和cyclin D1表达均升高。免疫荧光染色结果显示，转染后24 h和48 h，p-AKT(Ser473)、p-GSK-3β(Ser9)和cyclin D1在pEGFP-G93A-SOD1转染的N2a细胞中表达均升高。应用siRNA沉默AKT后与对照组相比，在转染后48 h和72 h，AKT、p-AKT(Ser473)、GSK-3β、p-GSK-3β(Ser9)和cyclin D1蛋白均降低。MTS实验结果显示，在AKT沉默后72 h、96 h、120 h，N2a细胞增殖和活力降低。 结论 SOD1G93A突变影响N2a细胞中AKT、GSK-3β翻译后磷酸化修饰及cyclin D1的表达，AKT可能通过调控GSK-3β和cyclin D1影响SOD1 G93A突变N2a细胞的增殖和存活。
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| 关 键 词： | 肌萎缩侧索硬化症 成神经瘤细胞N2a AKT 糖原合成激酶-3β 细胞周期蛋白D1 免疫印迹法 小鼠 |
| 收稿时间： | 2015-10-08 |
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