荧光探针法检测脏器硫化氢方法的建立及验证北大核心CSCD

目的快速制备并分离纯化硫化氢特异性荧光探针(Washington State Probe-5),建立动物组织中硫化氢的荧光探针测定法,并在癌性胸水模型中进行方法适用性验证。方法优化条件分离纯化WSP-5;对荧光探针反应液配制溶剂、DMSO加入体积、pH、反应液溶剂和反应液体积、样品前处理温度、研磨次数、研磨后静置时间等条件进行考察;以S-180腹水瘤细胞建立癌性胸水小鼠模型,测定小鼠各脏器中的硫化氢含量。结果以硅胶和葡聚糖凝胶为固定相,二氯甲烷-甲醇-甲酸(60∶1∶0.1,V/V/V)和二氯甲烷-甲醇(1∶1,V/V)为洗脱剂制备WSP-5纯品;动物组织样本和硫氢化钠标准溶液加入优化后的5倍量冰冷反应液,低温研磨、高速离心,上清液避光孵育12 h,测定荧光强度并计算硫化氢浓度;该方法检测限约0.6μmol·L^(-1),定量限1μmol·L^(-1),在硫氢化钠一定浓度范围内,浓度与荧光强度线性系数均大于0.99;在癌性胸水小鼠模型中,各脏器硫化氢含量随着注射癌细胞数量的增多均有不同程度的增加趋势。结论该方法操作简单、成本低、灵敏度高、特异性强,适合各类组织样本的高通量检测,可为硫化氢相关药效机制的深入研究和相关药物开发提供方法学参考。