NADPH氧化酶在rd小鼠遗传性视网膜变性中的活化表达

背景研究表明，小胶质细胞中烟酰胺二磷酸腺苷（NADPH）氧化酶的活化在中枢神经系统神经元损伤及神经变性疾病中发挥重要作用。已有研究证实NADPH氧化酶在rd小鼠视锥细胞退行性改变中的作用，但关于其在rd小鼠视网膜变性早期视杆细胞病变过程中的作用研究较少。目的研究NADPH氧化酶在rd小鼠感光细胞凋亡过程中的活化表达，探讨其在遗传性视网膜变性中的致病作用。方法取出生后8、10、12、14、16、18d的rd小鼠各18只，过量麻醉法处死后提取视网膜总RNA和总蛋白，并制备视网膜切片，分别用实时荧光定量PCR及Western blot法测定在rd小鼠感光细胞凋亡过程中视网膜中NADPH氧化酶亚单位gp91phox mRNA及蛋白的定量表达变化；采用免疫组织化学及gp91phox和CD11b免疫荧光双染法确定gp91phox在不同鼠龄rd小鼠视网膜中的表达及定位，并与其近交系C57BL／6N小鼠进行比较。结果实时荧光定量PCR研究证实，C57BL／6N小鼠视网膜中未见gp91phox mRNA的表达，而生后8d的rd小鼠视网膜中即有少量gp91phox mRNA的表达，随着鼠龄的增加，gp91phox mRNA表达量（gp91phox mRNA／β-actin）逐渐增加，生后14d达到高峰。不同鼠龄rd小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量差异有统计学意义（F=17．81，P=0．00）；生后10、12、14、16、18d的Td小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量均明显高于出生后8d小鼠，差异均有统计学意义（均P〈0．05），以出生后14d表达量最高，为1．136±0．370。随着小鼠鼠龄的增加，视网膜中gp91phox蛋白表达量（A值）与其基因表达变化趋势一致，不同鼠龄及C57BL／6N对照小鼠间视网膜中gp91phox蛋白表达的差异有统计学意义（F=354．00，P〈0．01），不同鼠龄rd小鼠出生后视网膜中gp91phox蛋白表达量均明显高于C57BL／6N对照小鼠，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。免疫组织化学法检测表明，rd小鼠出生后10d视网膜内层gp91phox阳性细胞开始增多，出生后14d达到高峰，外核层也可见到gp91phox阳性细胞。免疫荧光双染结果显示，gp91phox与小胶质细胞标志物CD11b共表达，呈现橙色荧光。结论NADPH氧化酶在rd小鼠视网膜中的表达随着鼠龄的增长而增多，其表达与小胶质细胞活化及感光细胞的凋亡相平行，提示NADPH氧化酶可能在小胶质细胞活化导致的感光细胞凋亡中发挥致病作用。

Changes of NADPH oxidase expression in retina of rd mice