| 自身抗原组氨酰转移核糖核酸合成酶的基因克隆和原核表达研究 |
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| 引用本文： | 杨湘越,兰小鹏,廖剑,钟智强,朱忠勇. 自身抗原组氨酰转移核糖核酸合成酶的基因克隆和原核表达研究[J]. 中华检验医学杂志, 2005, 28(11): 1201-1203 |
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| 作者姓名： | 杨湘越 兰小鹏 廖剑 钟智强 朱忠勇 |
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| 作者单位： | 350025,南京军区福州总医院全军医学检验中心 |
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| 基金项目： | 福建省青年人才科技创新基金资助项目（2002J060） |
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| 摘 要： | 目的研究建立用克隆、表达和鉴定人自身抗原组氨酰转移核糖核酸合成酶（HARS，亦称Jo-1抗原）检测多发性肌炎／皮肌炎（PM／DM）自身免疫抗体的方法。方法用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）从HL-60细胞株中克隆人自身抗原Jo-1全长基因，将PCR产物直接进行TA克隆、鉴定及测序，再定向克隆至pGEX-5T载体中，并转入大肠杆菌BL-21；阳性克隆鉴定后在异丙基．β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导下表达，然后对其产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（IBT）检测。结果PCR产物约1500bp，与预期1526bp接近，测序结果与基因库核酸完全一致。pGEX-5T-Jo-1重组阳性克隆酶切鉴定正确，SDS-PAGE和IBT结果显示，融合蛋白分子量75000，具有天然人自身抗原Jo-1的免疫原性。结论成功克隆表达人自身抗原Jo-1，为建立PM／DM自身免疫抗体检测方法奠定了基础。
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| 关 键 词： | 自身抗原 克隆 分子 融合基因 |
| 收稿时间： | 2005-06-13 |
| 修稿时间： | 2005-06-13 |
Gene cloning and fusion expression of human autoantigen Jo-1 in E.coli |
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| YANG Xiang-yue,LAN Xiao-peng,LIAO Jian,ZHONG Zhi-qiang,ZHU Zhong-yong. Gene cloning and fusion expression of human autoantigen Jo-1 in E.coli[J]. Chinese Journal of Laboratory Medicine, 2005, 28(11): 1201-1203 |
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| Authors: | YANG Xiang-yue LAN Xiao-peng LIAO Jian ZHONG Zhi-qiang ZHU Zhong-yong |
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| Affiliation: | PLA Medical Laboratory Center of Fuzhou General Hospital, Fuzhou 350025, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Autoantigens Cloning,molecular Gene fusion |
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