长链非编码RNA，PTENP1通过miR-3611/PTEN基因途径调控宫颈癌进程的分子机制研究

目的 探讨长链非编码RNA PTENP1（以下简称“PTENP1”）在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法 选取2019年1月至2022年12月海南省妇女儿童医学中心诊断的54例的癌组织与癌旁组织，另选取宫颈癌细胞系（HeLa、SiHa、C33A、Caski）和正常宫颈上皮细胞系（H8），采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测PTENP1、miR-3611、PTEN基因、PTEN蛋白水平。选取合适的宫颈癌细胞系，比较PTENP1在细胞质和细胞核中的表达情况，并进一步将其分为空白组（无处理）、pcDNA3.1组（转染pcDNA3.1）、pcDNA3.1-PTENP1组（转染pcDNA3.1-PTENP1）、NC组（阴性对照，转染模拟物或抑制剂NC）、miR-3611抑制剂组（转染miR-3611 抑制剂）、pcDNA3.1-PTENP1+NC组（转染pcDNA3.1-PTENP1和NC）和pcDNA3.1-PTENP1+miR-3611 mimics组（转染pcDNA3.1-PTENP1和miR-3611模拟物）。比较空白组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-PTENP1组PTENP1、miR-3611、PTEN基因、PTEN蛋白及上皮间质转化的相关指标，采用细胞活力检测及流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况；比较空白组、NC组、miR-3611抑制剂组miR-3611、PTEN基因、PTENP1水平；比较pcDNA3.1-PTENP1+NC组和pcDNA3.1-PTENP1+miR-3611 mimics组的细胞增殖情况及上皮间质转化的相关指标。采用双萤光素酶报告基因及RNA下拉实验验证miR-3611与PTENP1、PTEN基因的靶向关系。 结果 癌组织PTENP1、PTEN基因、PTEN蛋白水平低于癌旁组织，miR-3611水平高于癌旁组织（P＜0.05）。HeLa、SiHa、C33A、Caski细胞PTENP1、PTEN基因、PTEN蛋白水平低于H8细胞，miR-3611水平高于H8细胞（P＜0.05），后续实验选择HeLa、Caski细胞进行，PTENP1在HeLa、Caski细胞质中高表达。pcDNA3.1-PTENP1组PTENP1、凋亡率、上皮钙黏素、PTEN基因高于空白组，细胞增殖活力（培养48、72、96 h）及ZEB1、Snail、波性蛋白、miR-3611低于空白组（P＜0.05）。miR-3611抑制剂组miR-3611低于空白组，PTEN基因、PTENP1高于空白组（P＜0.05）。pcDNA3.1-PTENP1+miR-3611 mimics组细胞增殖活力（培养48、72、96 h）、上皮钙黏素低于pcDNA3.1-PTENP1+NC组，ZEB1、Snail、波性蛋白高于pcDNA3.1-PTENP1+NC组（P＜0.05）。野生型miR-3611转染生物素标记的HeLa、Caski细胞的PTENP1水平高于转染生物素标记的空白细胞和突变型miR-3611转染生物素标记的细胞，分别转染PTENP1或PTEN野生型和miR-3611模拟物的293T细胞的相对萤光活性低于仅转染PTENP1或PTEN野生型的293T细胞（P＜0.05）。结论 PTENP1通过竞争性结合miR-3611调控PTEN表达影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。

Study of molecular mechanism of regulation in cervical cancer progression by long non-coding RNA PTENP1 via miR-3611/PTEN gene pathway