新基因XTP11表达蛋白在酵母细胞中的转录激活功能研究

目的 构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP11的酵母表达载体，探索应用酵母双杂交系统克隆与XTP11蛋白结合的肝细胞蛋白的可行性。方法 用聚合酶链反应（PCR）扩增XTP11编码基因，并在其5＇端引入Nco I／BamHI酶切位点，连接入酵母表达载体pGBKT7中，构建编码XTP11全序列与酵母蛋白GAL4 DNA结合域融合蛋白的酵母表达质粒，转化酵母细胞AHl09并应用Westem blot方法检测XTP11蛋白表达。然后铺于含有X-α半乳糖的SD／-Trp和SD／-Trp-His-Ade营养缺陷型培养基上进行自激活验证（蓝／白筛选）。结果 成功地构建了XTP11的酵母表达载体并在酵母细胞中表达相应的融合蛋白，转化了pErBKT7-XTP11的AH109酵母细胞在两种营养缺陷型培养基上均可正常生长，并且可以产生α-半乳糖苷酶，从而在铺有x_n半乳糖的培养基上呈现蓝色，表明XTP11蛋白代替了酵母GALA蛋白的DNA激活域发挥作用，从而激活下游报告基因（ADE2，HIS：3，MEL1和LacZ）的表达。结论 全序列XTP11蛋白与GALA DNA结合域的融合蛋白在酵母细胞中呈现转录激活功能，限制了应用酵母双杂交系统研究XTP11的肝细胞结合蛋白。