| C-末端缺陷JAK3逆转录病毒载体的构建及在真核细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 张平,毕建虹,蔡美英,章崇杰,王蓉,赵宗蓉,魏大鹏,唐梅. C-末端缺陷JAK3逆转录病毒载体的构建及在真核细胞中的表达[J]. 四川大学学报(医学版), 2002, 33(4): 536-539 |
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| 作者姓名： | 张平 毕建虹 蔡美英 章崇杰 王蓉 赵宗蓉 魏大鹏 唐梅 |
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| 作者单位： | 1. 四川大学华西医学中心,免疫学教研室,成都,610041
2. 四川省人民医院,检验科 |
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| 基金项目： | 华西医科大学校基金资助 |
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| 摘 要： | 目的 以逆转录病毒 PL XSN为载体 ,构建重组逆转录病毒 C-末端缺陷的 JAK3[c- term defi-cient JAK3,JAK3(ΔC) ]载体 PL JAK3(Δ C) ,以 BAL B/ c3T3为靶细胞 ,转染 JAK3(ΔC) c DNA,检测 JAK3(Δ C)蛋白在真核细胞中的表达情况。为利用 JAK3(ΔC)对白血病进行基因治疗的实验研究打基础。方法 用限制性内切酶法从质粒 Pc DNA3- JAK3(Δ C)中分离目的基因片段 ,连接到逆转录病毒载体 PL XSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体 PL JAK3(Δ C) ,通过转化感受态细菌扩增并检测 DNA序列及限制性内切酶酶切鉴定 ;用脂质体L IPOFECTAMINE介导法将 PL JAK3(Δ C)转染包装细胞 PA317细胞 ,并用 G4 18筛选抗性细胞克隆 ,收集病毒 ;用该病毒感染靶细胞 BAL B/ c3T3,G4 18筛选抗性克隆并测定病毒滴度 ;抗性细胞扩增培养 ,细胞溶解后经免疫沉淀 (IP)、Western blotting检测 BAL B/ c3T3细胞中 JAK3(Δ C)的表达情况。结果 1重组逆转录病毒载体 PL -JAK3(Δ C)酶切和 DNA测序均表明含有 2 796 bp的 JAK3(ΔC)基因 ;2病毒滴度为 1.2× 10 4 CFU/ ml;3PL JAK3(Δ C)转染 BAL B/ C3T3细胞中表达出了 JAK3(Δ C)蛋白 ,其相对分子质量为 10 7× 10 3。结论 该研究构建的 C-末端缺陷 JAK3重组逆转录病毒载体 PL JAK3(
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| 关 键 词： | JAK3(ΔC) 逆转录病毒载体 真核细胞 |
| 修稿时间： | 2002-01-09 |
Construction of C-term Deficient JAK3 Retroviral Vector and Detection of Its Expression in Eukaryotic Cell |
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| Zhang Ping ,Bi Jianhong,Cai Meiying,Zhang Chongjie,Wang Rong,Zhao Zongrong,Wei Dapeng,Tang Mei. Construction of C-term Deficient JAK3 Retroviral Vector and Detection of Its Expression in Eukaryotic Cell[J]. Journal of Sichuan University. Medical science edition, 2002, 33(4): 536-539 |
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| Authors: | Zhang Ping Bi Jianhong Cai Meiying Zhang Chongjie Wang Rong Zhao Zongrong Wei Dapeng Tang Mei |
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| Affiliation: | Zhang Ping *,Bi Jianhong,Cai Meiying,Zhang Chongjie,Wang Rong,Zhao Zongrong,Wei Dapeng,Tang Mei. *Department of Immunology,West China Medical Center,Sichuan University,Chengdu 610041,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | JAK3 Retroviral vector Eukaryotic cell |
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