酵母双杂交技术筛选p7TP2蛋白结合肝细胞蛋白的编码基因 |
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引用本文: | 袁菊,成军,洪源,靳亚平,韩莉,陶明亮,李越,王琦.酵母双杂交技术筛选p7TP2蛋白结合肝细胞蛋白的编码基因[J].中华实验和临床感染病杂志(电子版),2007,1(2):72-75. |
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作者姓名: | 袁菊 成军 洪源 靳亚平 韩莉 陶明亮 李越 王琦 |
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作者单位: | 1. 100011,北京地坛医院传染病研究所;西北农林科技大学动物科技学院 2. 北京地坛医院传染病研究所,100011 3. 西北农林科技大学动物科技学院 |
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基金项目: | 国家重点基础研究项目 |
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摘 要: | 目的 筛选HCV p7蛋白反式调节蛋白p7TP2的结合蛋白,探讨HCV的致病机制及新蛋白p7TP2的生物学功能.方法 应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的p7TP2基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化单倍体酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝细胞文库质粒pACT2的单倍体酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠埃希菌氨苄青霉素-LB平板上选择并测序,结果在GenBank中进行生物信息学分析.然后将阳性文库质粒与诱饵质粒回交,以证实其相互作用.结果 筛选出与p7TP2结合的蛋白基因10个,其中包括金属硫蛋白2A、载脂蛋白H、蛋白C、果糖二磷酸醛缩酶B、配对免疫球蛋白样2型受体α、CTL1基因类胆碱运输蛋白等已知功能蛋白基因相互作用,回交试验已经证实其相互作用.结论 由本研究结果发现p7TP2蛋白可以结合一系列不同功能的肝细胞蛋白,作为一种新基因,对它的进一步作用机制的研究将为阐明HCV感染及慢性肝炎、肝纤维化和肝癌的病理机制提出新的思路.
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关 键 词: | 酵母双杂交 回交试验 抗凝血 |
Screening of proteins binding to p7TP2 protein from liver cDNA library by yeast two-hybrid technique |
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Abstract: | |
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Keywords: | HCV p7 |
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