低糖低氧状态下AMPK通路通过PPARα 调控CPT1c 影响人甲状腺乳头状癌B-CPAP细胞的凋亡

目的：探究在低糖低氧状态下通过磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMP-dependent/activated protein kinase，AMPK）通路调控肉碱脂酰转移酶1c（carnitine palmitoyltransferase 1c，CPT1c）的表达对甲状腺乳头状癌B-CPAP细胞增殖及凋亡的作用及其机制。方法：对正常条件和低糖低氧条件下培养的人甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP，分别给予AMPK抑制剂Compound C处理，使用Western blotting 检测AMPK、p-AMPK、过氧化物酶体增殖物激活受体α（peroxisome proliferator-activated receptor α，PPARα）、CPT1c 的表达，并利用CCK-8 法及FACS 检测各组细胞的增殖和凋亡情况。合成的PPARα-siRNA 转染B-CPAP 细胞以敲低PPARα，分别在正常和低糖低氧环境下培养，同样检测上述指标，以验证PPARα 对CPT1c 的调控作用。构建人CPT1c 基因启动子荧光素酶报告质粒，利用免疫荧光法观察PPARα 对CPT1c 基因启动子荧光素酶活性的影响。结果：（1）低糖和低氧条件下培养的B-CPAP细胞中，AMPK、p-AMPK、PPARα、CPT1c 表达均显著增加（均P<0.05 或P<0.01），细胞增殖和凋亡率未有明显改变（均P>0.05）；（2）应用AMPK抑制剂Compound C后，低糖低氧组p-AMPK、PPARα、CPT1c 明显降低（P<0.05 或P<0.01），细胞增殖抑制率及凋亡率显著升高（均P<0.01），但升高幅度仍小于单独加抑制剂后高于正常对照的幅度（P<0.05）。（3）PPARα 敲低后，正常条件下培养的肿瘤细胞的AMPK、p-AMPK、PPARα、CPT1c 的表达显著减少（P<0.05 或P<0.01），细胞增殖抑制率及凋亡率均显著升高（均P<0.05）；低糖低氧培养条件下，转染后细胞CPT1c 表达显著降低（P<0.05），细胞增殖抑制率及凋亡率有显著升高（均P<0.05），但升高幅度仍低于转染后高于正常对照的幅度（P<0.05）。（4）转染过表达PPARα 后，空载组双荧光比值与空白组无差异（P>0.05），PPARα 过表达组双荧光比显著增高（P<0.05）。结论：甲状腺乳头状癌B-CPAP细胞在低糖低氧状态下，AMPK通路能够通过上调PPARα 促进CPT1c的表达，从而抑制细胞凋亡和维持细胞增殖能力。