| 重组平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体的构建及表达 |
| |
| 引用本文： | 崔颖,谢策,魏晓晴,赵莹,吕广艳,王辉,高颖.重组平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体的构建及表达[J].医学信息,2009,22(11). |
| |
| 作者姓名： | 崔颖 谢策 魏晓晴 赵莹 吕广艳 王辉 高颖 |
| |
| 作者单位： | 崔颖,魏晓晴,赵莹,吕广艳,王辉(辽宁省医学细胞分子生物学重点实验室,辽宁,大连,116044);谢策(大连医科大学生化教研室,辽宁,大连,116044);高颖(辽宁省医学细胞分子生物学重点实验室,辽宁,大连,116044;大连医科大学生化教研室,辽宁,大连,116044) |
| |
| 基金项目： | 1.国家自然科学基金资助项目(30470394)2.辽宁省教育厅重点实验室项目(20060196)3.辽宁省科技厅自然科学基金项目 |
| |
| 摘 要： | 目的 构建重组全长平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)ATP结合位点突变体,以研究平滑肌MLCK的结构与功能.方法 利用试剂盒对MLCK ATP结合位点进行定点突变,构建全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体重组表达载体pCold/BsMLCK/△ATP,在大肠杆菌中表达:利用SDS-PAGE鉴定表达的重组全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体在细胞中的分布:运用亲和层析及凝胶过滤分离纯化重组全长MLCK并利用SDS-PAGE鉴定表达MLCK的纯度.结果 重组全长MLCK/△ATP(突变型)在大肠杆菌中以可溶的形式大量表达;在样品的上清和沉淀中均有重组全长MLCK/△ATP表达;经CaM-Sepharose 4B和Superose 6 HR纯化,SDS-PAGE鉴定得到单一的表达条带.结论 重组全长MLCK/△ATP(突变型)可以在大肠杆菌中以可溶形式大量表达;SDS-PAGE结果显示重组全长MLCK/△ATP可以通过亲和层析和凝胶过滤纯化得到单一的条带.
|
| 关 键 词： | 重组载体 突变体 |
Construction and Expression of the Recombinant Smooth Muscle Myosin Light Chain Kinase and the ATP Binding Site Mutant |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | MLCK |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
