| 感染人单核细胞THP-1前后钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达差异性 |
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| 引用本文： | 孙萍萍,林旭瑷,李立伟,严杰.感染人单核细胞THP-1前后钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达差异性[J].中华微生物学和免疫学杂志,2012,32(3). |
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| 作者姓名： | 孙萍萍 林旭瑷 李立伟 严杰 |
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| 作者单位： | 浙江大学医学院病原生物学系, 杭州,310058 |
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| 基金项目： | 传染病国家重大科技专项 |
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| 摘 要： | 目的 了解感染人单核细胞THP-1前后钩端螺旋体(简称钩体)外膜蛋白表达变化,为选择钩体基因工程疫苗候选抗原提供依据.方法 采用Triton X-114法提取感染THP-1细胞前后问号钩体黄疸出血群赖型赖株外膜蛋白.采用双向电泳技术分离钩体外膜蛋白,银染色法检测感染前后钩体外膜蛋白表达量及其差异.感染细胞后4个表达显著上调和4个表达显著下调的钩体蛋白点胰酶水解后,采用LC-MS/MS方法进行鉴定.应用生物信息学软件分析靶蛋白跨膜区和信号肽,采用实时荧光定量RT-PCR检测感染细胞前后靶基因mRNA水平变化.构建靶基因原核表达系统,采用钩体感染豚鼠模型了解重组靶蛋白的免疫保护作用.结果 感染THP-1细胞60 min后,问号钩体赖株外膜蛋白中Loa22、GroEL、F0F1 ATP合成酶α和β亚单位表达水平均显著升高(P＜0.05),FluB2、LigB、OmpA和OmpA家族蛋白表达显著下降(P＜0.05),实时荧光定量RT-PCR检测结果与之基本一致.生物信息学分析结果显示,上述8个外膜蛋白中,OmpA和OmpA家族蛋白为跨膜蛋白,其余均无跨膜结构,Loa22、LigB和OmpA家族蛋白含有信号肽.200 μg重组表达的靶蛋白 rLoa22或rGroEL对豚鼠的免疫保护率均为75.0％.结论 问号钩体赖株感染细胞时外膜蛋白表达谱可发生明显变化.感染后高表达的钩体外膜蛋白尤其是GroEL和Loa22,可作为钩体基因工程疫苗侯选抗原.
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| 关 键 词： | 钩端螺旋体 外膜蛋白 双向电泳 |
Diversity of outer membrane protein expression of Leptospira interrogans during infection of human THP-1 monocytes |
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| SUN Ping-ping
,
LIN Xu-ai
,
LI Li-wei
,
YAN Jie.Diversity of outer membrane protein expression of Leptospira interrogans during infection of human THP-1 monocytes[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2012,32(3). |
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| Authors: | SUN Ping-ping LIN Xu-ai LI Li-wei YAN Jie |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Leptospira interrogans Outer membrane proteins Two-dimensional gel electrophores |
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