不同CA16流行株的相关生物学和VP1基因的分子生物学研究

目的 对柯萨奇病毒A组16型(CA16)病毒株进行生物学特征与基因背景研究,为CA16病原和疫苗的进一步研究奠定基础.方法 从咽拭子标本中分离出CA16病毒；通过中和鉴别试验和RT-PCR对病毒进行分子生物学鉴定；病毒的VP1基因序列测定后,与其他CA16序列进行比较,绘制种系发育树,确定病毒基因型；测定病毒滴度,观察病毒在Vero细胞上的噬斑形态；攻击乳鼠分析病毒的致病性.结果 从手足口病患者咽拭子标本中分离到6株病毒,采用肠道病毒通用引物可以从病毒感染细胞中扩增出约150 bp大小的目的产物带；采用CA16特异性引物可以从病毒感染细胞中扩增出210 bp大小的目的产物带.而采用EV71特异性引物未见特异性扩增条带.噬斑分析发现,6株病毒在Vero细胞上接种96 h后均能出现清晰的噬斑,其中BJ-3噬斑直径为4～5 mm,B J-5噬斑直径约为3 mm,B J-1、B J-2、BJ-4、BJ-6噬斑直径为1.5 ～2 mm；除BJ-3噬斑边缘模糊外,其余5株噬斑边缘整齐.该6株病毒均可被人CA16抗体阳性血清中和.在Vero细胞上连续传5代,滴度均在7.0LgCCID50/nl左右.基于VPI基因序列的种系发育分析结果显示,BJ-2、B J-4、B J-5属于C1亚型,BJ-1、BJ-3、BJ-6属于C3亚型,该6株病毒核苷酸同源性达90％以上,氨基酸同源性达99％以上.乳鼠攻击试验结果显示,BJ-3和BJ-5攻击后第4～5天乳鼠开始发病,后肢出现明显的麻痹、瘫痪症状,至第6～7天全部死亡,正常对照组和其他病毒组直至攻击后第14天均无异常.结论 不同CA16病毒株的生物学特性有所不同,基因背景相近,致病性明显不同,需进一步了解中国流行的 CA16病毒株的致病特点,为疫苗的研发提供直接依据.

Comparison of biological and genetic background of CA16 between different epidemic strains