| 结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6-CFP10的融合表达及纯化 |
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| 引用本文： | 娄培安,王晓婷,周艳秋,章辉,刘加彬,李玲,赵广法,朱荫昌.结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6-CFP10的融合表达及纯化[J].热带病与寄生虫学,2005,3(4):196-200,195. |
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| 作者姓名： | 娄培安 王晓婷 周艳秋 章辉 刘加彬 李玲 赵广法 朱荫昌 |
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| 作者单位： | 221001,江苏徐州市,徐州市疾病预防控制中心;江苏省血吸虫病防治研究所;徐州市泉山区疾病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 2003-2004年度江苏省预防医学科研基金项目(Y200424)，徐州市2004年度第五批科技计划项目(x2004541) |
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| 摘 要： | 目的在原核表达系统融合表达结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6和培养滤液蛋白CFP10的融合蛋白(rE6C)并纯化,测定抗原性和特异性。方法用将一个柔性的氨基酸“接头”插入原核表达载体pET32c(﹢)中,构建pET32c(﹢)-linker。PCR法扩增ESAT-6、CFP10基因。将ESAT-6克隆入改建的载体pET32c(﹢)的linker前,CFP10克隆入linker后,构建E6C融合基因,转化大肠杆菌XL1-blue,抽提质粒,酶切鉴定;在大肠杆菌BL21中表达,纯化rE6C蛋白,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测其抗原性和特异性。结果重组质粒pET32c(﹢)-ESAT-6-CFP10靶基因的测序结果与预计序列完全一致。携带重组质粒的菌株经诱导产生高水平的表达产物,纯化的表达产物具备较高的纯度、抗原性和特异性。结论pET32c(﹢)-ESAT-6-CFP10质粒在BL21菌中能高效表达,rE6C融合蛋白具有良好的抗原性和特异性,有望用于结核分枝杆菌感染的临床诊断。
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 抗原 重组 酶联免疫吸附测定 |
| 修稿时间： | 2005年11月8日 |
Molecular cloning, fused expression and application of recombinant Mycobacterium tuberculosis ESAT-6-CFP10 fusion protein |
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| Lou Pei'an,Wang Xiaoting,Zhou Yanqiu,Zhang hui,liu Jiabin,li ling,Zhao Guangfa,Zhu Yinchang.Molecular cloning, fused expression and application of recombinant Mycobacterium tuberculosis ESAT-6-CFP10 fusion protein[J].Journal of Tropical Diseases and Parasitology,2005,3(4):196-200,195. |
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| Authors: | Lou Pei'an Wang Xiaoting Zhou Yanqiu Zhang hui liu Jiabin li ling Zhao Guangfa Zhu Yinchang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycobacterium tuberculosis Antigen Gene Recombiant Enzyme- linked immunoab- sorbant assay |
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