| Foxp3酵母双杂交诱饵表达载体的构建、鉴定和其毒性及自激活效应检测 |
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| 引用本文： | 周丽娜,吴军,罗高兴,贺伟峰,陈希炜,柏甘萍,石东文,王庆红,袁顺宗,张小容,胡晓红. Foxp3酵母双杂交诱饵表达载体的构建、鉴定和其毒性及自激活效应检测[J]. 第三军医大学学报, 2006, 28(8): 781-784 |
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| 作者姓名： | 周丽娜 吴军 罗高兴 贺伟峰 陈希炜 柏甘萍 石东文 王庆红 袁顺宗 张小容 胡晓红 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的利用酵母双杂交系统,构建人Foxp3酵母双杂交体系中的诱饵载体,并对其进行鉴定.方法获得正常人外周血 PBMC,抽提mRNA,通过巢式 RT-PCR 在人外周血PBMC中获得Foxp3基因片断,纯化后连接至 pMD18-T 载体,测序正确,EcoRⅠ、SalⅠ双酶切pMD18-T-Foxp3和酵母表达载体 pGBKT7,回收产物并连接,重组质粒命名为 pGBKT7-Foxp3,测序正确,用醋酸锂法将重组质粒转化酶母菌 AH109,在缺陷性培养基上观察pGBKT7-Foxp3 在AH109中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和自激活功能.结果 RT-PCR 扩增出的DNA 片段约1 203 bp,大小正确,与pMD18-T载体连接,测序正确.构建的诱饵载体pGBKT7-Foxp3,测序结果表明序列完全正确,融合区域的读码框正确.pGBKT7-Foxp3转化酵母感受态AH109,在SD/-Trp 板上生长良好,在SD/-Trp/X-α-Gal平板上长出白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade /-Trp/X-α-Gal平板上不能生长,说明AH109[pGBKT7-Foxp3]转化成功,对酵母菌株AH109不具有毒性且不具自主激活报告基因的功能.结论成功获得了在酵母细胞中正确表达,并对酵母细胞无毒性且未自主激活报告基因的诱饵表达载体pGBKT7-Foxp3,可作为酵母双杂合系统中的"诱饵", 为下一步利用酵母双杂交系统筛选Foxp3相互作用蛋白创造了条件.
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| 关 键 词： | 基因 克隆 Foxp3 酵母双杂交 |
| 文章编号： | 1000-5404（2006）08-0781-04 |
| 收稿时间： | 2005-11-30 |
| 修稿时间： | 2005-11-302006-01-05 |
Expression and construction of "bait plasmid" containing human Foxp3 gene in yeast two-hybrid system |
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| ZHOU Li-na,WU Jun,LUO Gao-xing,HE Wei-feng,CHEN Xi-wei,BAI Gan-ping,SHI Dong-wen,WANG Qing-hong,YUAN Shun-zong,ZHANG Xiao-rong,HU Xiao-hong. Expression and construction of "bait plasmid" containing human Foxp3 gene in yeast two-hybrid system[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2006, 28(8): 781-784 |
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| Authors: | ZHOU Li-na WU Jun LUO Gao-xing HE Wei-feng CHEN Xi-wei BAI Gan-ping SHI Dong-wen WANG Qing-hong YUAN Shun-zong ZHANG Xiao-rong HU Xiao-hong |
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| Affiliation: | State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, Institute of Bums, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Foxp3 |
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