| 小鼠PPA1重组腺病毒的构建及在胰岛β细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 郑 月,张 许,韩 晓.小鼠PPA1重组腺病毒的构建及在胰岛β细胞中的表达[J].南京医科大学学报,2014(8):1019-1024. |
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| 作者姓名： | 郑 月 张 许 韩 晓 |
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| 作者单位： | 南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室,江苏 南京 210029;南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室,江苏 南京 210030;南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室,江苏 南京 210031 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81370878) |
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| 摘 要： | 目的:构建小鼠PPA1重组腺病毒,观察重组腺病毒在小鼠胰岛和β－TC6细胞中的表达,以及对脂肪酸引起的胰岛β细胞凋亡的影响?方法:将目的基因PPA1插入到腺病毒穿梭质粒pAdtrack－CMV中,质粒经PCR鉴定正确后用PmeⅠ酶切线性化,转到含有腺病毒骨架pAdeasy－1的 BJ5183细菌中进行同源重组,重组成功的质粒经PacⅠ酶切线性化后转染QBI－293A细胞,经包装得到Ad－PPA1腺病毒?根据绿色荧光蛋白(GFP)检测病毒滴度和感染效率?用病毒感染小鼠胰岛和β－TC6细胞,以Western blot法检测PPA1蛋白表达水平?Hoechst染色法检测PPA1对细胞凋亡的影响?结果:重组腺病毒载体pAdeasy－PPA1经酶切鉴定确认构建成功,将pAdeasy－PPA1转染QBI－293A细胞,观察细胞病变效应提示病毒成功包装?重组腺病毒能够有效感染小鼠胰岛和β－TC6细胞并成功过表达 PPA1蛋白?Hoechst染色结果表明过表达PPA1可保护脂肪酸引起的胰岛β细胞凋亡?结论:成功构建携带小鼠PPA1基因的重组腺病毒,并证实过表达PPA1具有抗凋亡的作用,为进一步研究PPA1在胰岛β细胞中的功能奠定了基础?
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| 关 键 词： | PPA1 腺病毒载体 胰岛β细胞 |
| 收稿时间： | 2014/4/17 0:00:00 |
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