| EGFP-N1/hNGF β逆转录病毒载体的构建及其表达 |
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| 引用本文： | 陈钢,杨彩虹,田林强,郭风劲,陈安民,SUN Kai.EGFP-N1/hNGF β逆转录病毒载体的构建及其表达[J].中国现代医学杂志,2011,21(13). |
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| 作者姓名： | 陈钢 杨彩虹 田林强 郭风劲 陈安民 SUN Kai |
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| 作者单位： | 1. 江西省人民医院,骨一科,江西,南昌,330006
2. 华中科技大学同济医学院附属同济医院,骨科,湖北,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 江西省自然科学基金(No:2007GZY0589) |
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| 摘 要： | 目的 构建高表达含人神经生长因子β基因(hNGF-β)的逆转录病毒栽体,并检测其在施万细胞中的表达情况.方法 从含有hNGF-β的pAAV-SP质粒中克隆出hNGF-β,连接到pEGFP-N1载体中,形成重组逆转录病毒载体pEGFP-N1-NGFβ.用重组体转染施万细胞,经G418筛选出阳性克隆后,用ELISA法检测NGF的表达量.结果 hNGF-β的RT-PCR产物约750bp,双酶切鉴定重组载体为正确重组子.荧光显微镜下观察证实转染的施万细胞表达EGFP,ELISA检测证实转染的施万细胞分泌hNGF β升高.结论 应用体外连接法成功构建了hNGF-β逆转录病毒载体,而且施万细胞能够高效表达NGF β.
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| 关 键 词： | 神经生长因子 施万细胞 基因表达 |
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