| 含绿色荧光蛋白基因重组质粒的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 席少静,何军,王小婕,范倩,滕艳萍.含绿色荧光蛋白基因重组质粒的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达[J].中国现代医学杂志,2011,21(19). |
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| 作者姓名： | 席少静 何军 王小婕 范倩 滕艳萍 |
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| 作者单位： | 1. 宁夏回族自治区人民医院 心血管科,宁夏 银川,750021
2. 宁夏医科大学附属医院 心脏中心,宁夏 银川,750004 |
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| 基金项目： | 宁夏自然科学基金(No:NZ0898) |
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| 摘 要： | 目的 构建与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合的重组真核表达载体,并转染大鼠血管平滑肌细胞(A7r5),观察其在A7r5中的表达.方法 采用Trizol法快速提取A7r5的总RNA,经RT-PCR获得线粒体融合蛋白2(mfn2)的cDNA,扩增、纯化、回收mfn2基因片段.用HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切扩增的大鼠mfn2基因片段和质粒pEGFP-N1,然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌DH5α.将提取的重组质粒进行酶切鉴定和测序.测序正确的重组质粒用脂质体法转染A7r5,24h后观察GFP表达情况,并用RT-PCR、Western blot方法检测mfia2的表达.结果 扩增出了1条约2.2 kb的片段,酶切结果显示重组质粒被切成4.7kb大小的pEGFP-N1载体和2.2kb大小的目的片段.经测序目的片段的序列与GeneBank中大鼠mfn2基因的开放阅读编码框序列完全一致.细胞转染48h后GFP表达量最多,RT-PCR、Western blot方法检测到mfn2在A7r5中高表达.结论 成功构建了含GFP基因重组真核表达载体,并且可以在A7r5中高表达.
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| 关 键 词： | 线粒体融合蛋白2 pEGFP-N1 重组真核表达质粒 血管平滑肌细胞 |
Construction of recombinant plasmid expressing green fluorescent protein and its expression in vascular smooth muscle cells |
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| XI Shao-jing
,
HE Jun
,
WANG Xiao-jie
,
FAN Qian
,
TENG Yan-ping.Construction of recombinant plasmid expressing green fluorescent protein and its expression in vascular smooth muscle cells[J].China Journal of Modern Medicine,2011,21(19). |
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| Authors: | XI Shao-jing HE Jun WANG Xiao-jie FAN Qian TENG Yan-ping |
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| Institution: | XI Shao-jing1,HE Jun2,WANG Xiao-jie2,FAN Qian2,TENG Yan-ping2(1.Cardiovascular Department,Ningxia People's Hospital,Yinchuan,Ningxia 750021,P.R.China,2.Heart Center,the Affiliated Hospital of Ningxia Medical University,Ningxia 750004,P.R.China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mitofusin-2 pEGFP-N1 eukaryotic expression plasmid vascular smooth muscle cell |
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