| 小鼠分泌型IL-1β真核表达载体的构建及其表达 |
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| 引用本文： | 肖伟玲,王雪净,牟东珍,林志娟,王焕芹,梁淑娟.小鼠分泌型IL-1β真核表达载体的构建及其表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2011,27(7). |
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| 作者姓名： | 肖伟玲 王雪净 牟东珍 林志娟 王焕芹 梁淑娟 |
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| 作者单位： | 潍坊医学院免疫学教研室,山东省高校免疫学重点实验室,山东,潍坊,261053 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，山东省卫生高层次人才专项基金，山东省科技攻关计划项目，潍坊医学院青年教师科研启动基金，山东省潍坊市科技局资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建小鼠经典分泌途径IL-1β真核表达载体,转染至Hepa1-6细胞,并测定其分泌表达水平.方法:引物延伸获得小鼠AFP信号肽序列(sAFP),RT-PCR扩增获得小鼠IL-1β成熟蛋白基因序列(mIL-1β),SOE方法将两段序列拼接形成融合基因,与pIRES2-EGFP质粒重组构建分泌型真核表达载体pIRES2-EGFP-smIL-1β,并将其转染至Hepa1-6细胞,RT-PCR检测融合基因的表达水平,'Western blot检测细胞内mIL-1β蛋白的表达,ELISA法测定培养上清及细胞裂解液中mIL-1β水平.结果:经SOE法拼接获得的融合基因与CenBank中登录的序列一致,RT-PCR检测显示该载体能够在Hepal-6细胞中表达融合基因mRNA,细胞培养上清中mIL-1β的分泌水平明显上升,而胞质中的mIL-1β无明显变化.结论:成功地构建了经典途径分泌的mIL-1β重组表达载体,该载体可以在Hepa1-6细胞培养上清中有效分泌具有生物活性的mIL-1β.
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| 关 键 词： | 鼠白细胞介素1β 信号肽 分泌表达 肝癌细胞 |
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