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| 大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体及在乳鼠心肌细胞中的表达☆ | |
| 引用本文： | 侯宁,袁文常,罗承锋,刘启才,罗健东.大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体及在乳鼠心肌细胞中的表达☆[J].中国组织工程研究与临床康复,2012,0(33):6152-6157. |
| 作者姓名： | 侯宁 袁文常 罗承锋 刘启才 罗健东 |
| 作者单位： | 1. 广州医学院药理学教研室,广东省广州市510182 2. 广州心血管疾病研究所,广东省广州市510260 3. 解放军兰州军区乌鲁木齐总医院全军临床检验诊断中心,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000 4. 广州医学院实验医学研究中心,广东省广州市510182 |
| 摘 要： | 背景:过氧化物酶体增生因子活化受体α是调节心脏脂肪酸氧化的重要核转录因子,利用基因工程技术构建其重组腺病毒载体对研究心脏能量代谢障碍机制具有重要意义.
目的:构建大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体,评价其在原代培养的乳鼠心肌细胞中的表达效率.
方法:采用RT-PCR法自SD大鼠肝脏扩增过氧化物酶体增生因子活化受体α基因,将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白的穿梭质粒载体pAd-Track-CMV.线性化重组穿梭质粒载体并转化入含有腺病毒骨架质粒pAd-Easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒.用脂质体将线性化的重组腺病毒载体质粒转染于人胚肾293细胞以包装、扩增,纯化病毒后计算滴度.用纯化的重组腺病毒转染心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率;荧光定量PCR、免疫印迹法检测细胞过氧化物酶体增生因子活化受体α mRNA、蛋白表达.
结果与结论:成功构建携带大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为3.5×1011 pfu/L.重组腺病毒转染心肌细胞的效率达90%以上,被转染细胞目的基因mRNA、蛋白表达显著增高.该载体的成功构建为研究过氧化物酶体增生因子活化受体α基因在心肌能量代谢障碍中的作用奠定基础. |
| 关 键 词： | 过氧化物酶体增生因子活化受体α 重组腺病毒 心肌细胞 转染 能量代谢 基因治疗 |
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